Ифа на гепатиты в и с

Ифа на гепатиты в и с

Переезд склада в Европу.
Реализуем препараты от гепатита С в России по закупочной цене - ликвидация склада
Перейти на сайт

Содержание статьи:

ИФА в диагностике вирусных гепатитов. Возможности иммуноферментного анализа

Специфическая лабораторная диагностика вирусных гепатитов основывается на применении иммунохимических и молекулярно-биологических методов исследований. Основными иммунохимическими методами являются радиоизотопный или радиоиммунный (РИА) и иммуноферментный (ИФА). В основе иммунохимических методов диагностики лежит специфическое взаимодействие антиген — антитело с последующим выявлением комплекса при помощи специальных меток. Наиболее распространенным является иммуноферментный анализ.

Первые сообщения о применении иммуноферментного анализа. как метода для определения каких-либо веществ были опубликованы в 1971 году одновременно двумя исследовательскими группами — В. Van Weemen, A. Schuurs и Е. Engvall, P. Perlmann. В основе иммуноферментного анализа лежит следующий принцип: на твердой фазе, в качестве которой используется, главным образом, поверхность лунок полистиролового планшета, фиксируется антиген возбудителя инфекции или антитела (часто смесь антител) к антигенам, которые необходимо обнаружить. Этот антиген или антитела, которые зафиксированы на твердой фазе, называются иммуносорбентом.

В результате инкубации иммуносорбента и испытуемой сыворотки при наличии определяемого агента происходит их связывание в комплекс антиген — антитело. После процедуры промывки, в ходе которой удаляются несвязанные антигены и антитела, проводится инкубация с конъюгатом. В качестве конъюгата при детекции HBsAg используют анти-HBs, при детекции антител к вирусу гепатита С —антитела к иммуноглобулинам человека (антивидовой конъюгат), меченные пероксидазой хрена. В итоге этой инкубации происходит присоединение к уже имеющимся комплексам антиген — антитело дополнительно внесенного конъюгата. После удаления несвязавшегося конъюгата (отмывки) в лунки вносится субстрат. При использовании пероксидазного конъюгата в качестве субстрата используют перекись водорода в сочетании с индикатором, в качестве которого наиболее часто применяют ортофенилендиамин (ОФД) или тетраметилбензидин (ТМБ). Результат оценивается фотометрически.

Качество и надежность аналитических возможностей иммуноферментного метода характеризуются рядом критериев, к числу которых относятся чувствительность, специфичность, правильность и воспроизводимость.

Чувствительность — то минимальное количество вещества, которое может быть обнаружено при помощи иммуноферментного анализа. При этом нижним пределом чувствительности данного метода является концентрация исследуемого вещества в образце, которая соответствует наименьшему положительному результату определения, статистически достоверно отличающемуся от показателей заведомо отрицательных образцов. Чувствительность ИФТС зависит от ряда обстоятельств, связанных как с конструкцией тест-системы (аффинность иммуносорбента, качества экстракционных и буферных систем), так и разрешающей способностью и точностью метода регистрации.

Специфичность — способность выявлять именно те компоненты, для определения которых предназначена данная иммуноферментная тест-система. Специфичность ИФА определяется во многом перекрестной реакцией антител или антигенов (то есть композиции, используемой в качестве иммуносорбента), с близкородственными соединениями, а также составом инкубационной среды (матрикс-эффект).

Правильность — соответствие среднего значения результатов повторных определений одного и того же контрольного образца с истинной величиной измеряемого параметра. Правильность определения в ИФА зависит от качества самой тест-системы и контрольного образца. Для хороших иммуноферментных тест-систем показатели правильности лежат в пределах 90-110 %. Особенностью медико-биологических исследований в ИФА является невозможность установления точной величины, и поэтому за истинную величину принимается средняя от нескольких экспертных лабораторий. Статистическим критерием правильности служит средняя арифметическая и степень ее отклонения от истинного значения, выраженная в процентах.

Воспроизводимость — способность тест-системы показывать одни и те же значения при повторных исследованиях одного и того же образца. Воспроизводимость зависит как от случайных погрешностей (ошибок) при проведении процедуры постановки реакции, так и от качества тест-систем и точности метода регистрации результатов. Считается, что воспроизводимость одних и тех же контрольных образцов одной фирмы в разных лабораториях не должна превышать величину коэффициента вариации в 15%.

Существует несколько специфических схем ИФА для определения маркеров вирусных гепатитов: а) прямой иммуноферментный анализ; б) непрямой иммуноферментный анализ; в) конкурентное ингибирование; в) «ловушеч-ный», или «capture» метод.

Из молекулярно-биологических методов диагностики вирусных гепатитов чаще используются полимеразная цепная реакция и гибридизация. Эти методы, особенно ПЦР, позволяют выявлять очень малые количества специфической вирусной ДНК или РНК и, таким образом, судить о репликации, а в ряде случаев и об активности репликации.

Анализ крови на гепатит С

Гепатит С является одним из самых распространенных заболеваний печени, которое возникает при инфицировании вирусом гепатита С (HСV), проникающим в организм преимущественно при контакте с кровью инфицированного человека. Встречается хронический и острый гепатит С. У 70-80 процентов пациентов с острым гепатитом С нет никаких симптомов заболевания, только в некоторых случаях через какое-то время после заражения бывают проявления болезни, которые выражаются в усталости, боли в животе, потере аппетита, потемнении мочи, рвоте, тошноте, осветлении кала, желтухе, боли в суставах. Как правило, симптомы возникают спустя 6-7 недель после заражения, но срок появления признаков заболевания варьируется от 2 недель до полугода. При возникновении вышеперечисленных симптомов нужно обратиться к врачу-инфекционисту и сдать анализ крови на гепатит С. Диагностика гепатита, проведенная своевременно, позволяет обнаружить заболевание еще на ранних стадиях и существенно увеличить шансы на выздоровление.

Когда назначается анализ на гепатит С

Ситуации, когда обязательно назначается анализ на гепатит С:

  • во время вынашивания беременности и при планировании семьи;
  • пациентам с симптомами хронического или острого гепатита;
  • человек находится в группе риска. Это медицинские работники, лица, пребывающие в местах лишения свободы, сотрудники правоохранительных органов, лица, которые употребляют наркотики, имеют большое число половых партнеров, страдают СПИДом, находятся на гемодиализе и прочие.

Подготовка к анализу на гепатит С

Специальной подготовки к анализу на гепатит С не требуется. Для анализа производится забор крови из вены натощак, при этом после последнего приема пищи должно пройти не менее восьми часов.

Анализы ИФА на гепатит С

Первый анализ, обычно назначаемый для диагностики гепатита С – ИФА тест (иммуноферментный анализ). Анализы ИФА на гепатит С позволяют обнаружить в крови наличие антител к вирусу гепатита С (anti-HCVAb). Если результат ИФА теста положительный, то это указывает на наличие контакта организма с вирусом гепатита С. Но у 40 процентов людей, у которых положительный ИФА, в крови тест вируса не обнаруживается. Это явление называется ложноположительным результатом. Также при помощи ИФА проверятся донорская кровь.

Анализы RIBA на гепатит С

Анализ RIBA на гепатит С используется для подтверждения положительного результата ИФА. Метод рекомбинантного иммуноблотинга (RIBA) является более точным исследованием наличия антител к вирусу гепатита С. Наличие в организме вируса гепатита С положительный результат этого анализа также не определяет, а только подтверждает присутствие антител.

Анализы ПЦР на гепатит С

С целью выявить наличие в крови вирусов гепатита С (RNA HCV) и поставить диагноз, чаще всего пользуются анализом методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Это исследование дает возможность обнаружить с высокой точностью присутствие в крови даже малого количества вируса. Анализ ПЦР на гепатит С может выявить наличие вируса уже спустя 5 дней после заражения, задолго до возникновения антител. Когда результат анализа ПЦР положительный, то это означает наличие активной инфекции.

Существуют такие вариации анализа ПЦР:

  • количественный ПЦР, позволяющий определить не только сам факт наличия вируса, но и вирусную нагрузку (количество вируса). Этот показатель имеет большое значение для определения эффективности лечения;
  • генотипирование, устанавливающее генотип вируса гепатита С, что важно для определения продолжительности и тактики лечения. Вируса гепатита С существует более 10 генотипов, но для клинической практики достаточно определения пяти, наиболее распространенных типов: 1a, 1b, 2,3а/3b.

Количественный анализ ПЦР проводится:

  • при качественном положительном тесте на присутствие в сыворотке РНК вируса гепатита С;
  • для точной оценки эффективности лечения;
  • для определения тактики лечения пациента.

Прямой взаимосвязи между тяжестью гепатита С и количеством вируса в крови не существует. Концентрация вируса влияет на инфекционность заболевания, то есть, чем больше количество вируса в крови больного, тем больше риск передачи вируса, к примеру, при половом контакте или от матери ребенку. Также от концентрации вируса зависит эффективность лечения. При проведении терапии благоприятным фактором является низкая вирусная нагрузка, а очень высокая – неблагоприятным.

Анализ генотипирования делается:

  • при качественном положительном тесте на присутствие в сыворотке РНК вируса гепатита С;
  • для точной оценки эффективности лечения;
  • для определения тактики лечения пациента;
  • для прогнозирования хронизации инфекционного процесса;
  • для определения прогрессирования заболевания.

Выявление генотипа вируса имеет большое значение для определения продолжительности лечения, что важно, поскольку интерферону присущи широкий спектр побочных действий и низкую переносимость больными.

Расшифровка анализа на гепатит С

В норме РНК вируса, антитела к ним и антигены полностью отсутствуют. Присутствие антител в крови свидетельствует о наличии хронического или острого гепатита С либо о периоде выздоровления. Если в крови присутствует RNA HCV, который определяется при анализе ПЦР, это указывает на наличие в крови вируса.

При неправильной технике проведения исследования, нарушениях транспортировки и забора крови анализ ПЦР иногда может показывать ложноположительные результат. Анализы ИФА и RIBA на ранних стадиях заболевания, когда организмом еще не выработано достаточное количество антител, могут показывать ложноотрицательный результат.

Если при расшифровке анализа на гепатит С получены положительные результаты, необходимо обращение к врачу-инфекционисту и гастроэнтерологу для дальнейшей диагностики и лечения.

Нейтрофилы сегментоядерные понижены

Тромбоциты у ребенка — норма, повышены, понижены

Тиреотропный гормон ТГТ

Диагностика гепатитов

Определить присутствие в организме гепатита одной из форм можно не сразу, поскольку инкубационный период заболевания может длиться до четырех недель. Когда же появляются первые признаки болезни, то в пораженном организме происходят радикальные изменения состава крови: биохимический анализ сообщает о серьезной проблеме со здоровьем и присутствии болезнетворного вируса. Однако для постановки окончательного диагноза вовсе недостаточно сдать кровь на гепатит, также необходима подробная диагностика гепатитов.

Лабораторная диагностика гепатитов

Проводить ее желательно после окончания инкубационного периода, чтобы врач с предельной точностью смог определить присутствующее в организме заболевание печенки. В противном случае назначенное лечение не даст желанного терапевтического эффекта и даже усугубит преобладающую клиническую картину.

Диагностика гепатита A

Как правило, диагностика гепатита A начинается с подробного расспроса пациента и назначения ряда анализов, которые необходимо выполнить в самые кратчайшие сроки. Это:

  • биохимический анализ крови;
  • полный клинический анализ крови;
  • метод ПЦР;
  • ИФА;
  • коагулограмма.

Если прогрессирует болезнь Боткина, то по результатам биохимического анализа крови наблюдается аномальный скачок билирубина, АлАТ и АсАТ, тимоловой пробы. Мало того, вырабатываются специфические анти-ВГА IgМ, которые являются неопровержимым фактом присутствия в организме гепатита A.
В общем анализе крови определяется спад лейкоцитов, скачок СОЭ и лимфоцитоз. И, тем не менее, самым надежным является метод ПЦР, который определяет показатель РНК болезнетворного вируса.
Дополнительно врач изучает симптоматику заболевания, после чего может поставить окончательный диагноз и преступить к наиболее эффективной терапии. Необходимость в инструментальном обследовании возникает крайне редко. После успешного консервативного лечения в условиях госпитализации и карантина пациента ожидает окончательное выздоровление, причем повторно гепатит A не рецидивирует.

Диагностика гепатита B

Определить присутствие вируса гепатита B также можно по результатам лабораторных исследований, и для этого первым делом требуется сдать кровь на гепатит. По своей природе болезнетворный вирус имеет три главных антигена – НВsАg, НВcАg и НВеАg, к которым в организме вырабатываются антитела. Основным в данной клинической картине является ИФА – иммуноферментный анализ, который как раз и выявляет специфические маркеры гепатита B.
Сразу стоит уточнить, что антиген НВsАg появляется в крови еще до первых симптомов гепатита и достоверно определяется в желтушном периоде. Однако отрицательный тест не исключает присутствия гепатита B, поэтому дополнительно требуется применение не менее эффективного метода полимеразной цепной реакции (ПЦР).
При подозрении на гепатит обязательным является биохимический анализ крови, который рекомендуется сдать в самую первую очередь. Выполнение биопсии печени и УЗИ органов брюшины оговаривается индивидуально, но, когда история болезни предельно ясна, в клинических методах обследования не возникает необходимости.

Эхограмма печени при аутоиммунном гепатите на стадиии хронического гепатита

Диагностика гепатита C

Для постановки этого диагноза вовсе недостаточно сдать кровь на гепатит, поскольку вирус может преобладать в организме в скрытой форме. И, тем не менее, основными лабораторными исследованиями являются все анализы, представленные выше, а также дополнительное выполнение биопсии печени. Это микроскопическое исследование биологического материала (в нашем случае кусочка ткани печени) определяет степень распространения патологического процесса и фиброз тканей. Забор материала выполняется под местным обезболивающим, осложнения такой процедуры выявляются в медицинской практике крайне редко.
При подозрении на гепатит C основным методом клинического обследования является УЗИ органов брюшины. Объясняется это просто: болезнь часто проявляется визуальным изменением пораженной печени, переменами в ее структуре и размерах. Таким способом можно определить:

  • размеры печенки, селезенки, поджелудочной железы и желчного пузыря;
  • патологические изменения в этих органах;
  • состояние общего кровотока в органах брюшины;
  • оптимальную зону для выполнения биопсии печени.

Этот метод клинического обследования определяет все очаговые патологии органа на микроскопическом уровне. Если на экране печень представлена в серой шкале, требуется немедленное проведение биопсии, поскольку серый цвет визуализирует пораженные ткани «человеческого фильтра».

Профилактика гепатитов

Поскольку болезнь проявляется не сразу, приступить к немедленному лечению получается далеко не во всех клинических картинах. Пациент может просто не знать о существовании в организме болезнетворного вируса, а тот, в свою очередь, стремительно распространяется в кровь и поражает здоровые клетки печени.
Чтобы избежать столь трагичной участи, рекомендуется соблюдать все профилактические меры. Такая бдительность заметно сократит риск заболеваемости и избавит от серьезных проблем со здоровьем в будущем. Основные правила профилактики представлены ниже:

  • мыть руки после улицы;
  • подвергать качественной обработке свежие овощи, фрукты;
  • выполнять все профилактические прививки, указанные в ежегодном календарном плане;
  • избирательно относиться к сексуальным партнерам;
  • избегать контакта с больными людьми;
  • пользоваться только одноразовыми шприцами и проявлять особую бдительность на станциях переливания крови.

Также рекомендуется регулярно (один раз в полгода) сдавать кровь на гепатит, чтобы удостовериться, что вирус не проник в организм, и не поражает некогда здоровые клетки печенки. Если же диагноз определен, требуется немедленно стать на диспансерный учет и следовать всем рекомендациям специалиста.

Автор публикации:
Сыропятов Сергей Николаевич
Образование: Ростовский Государственный Медицинский Университет (РостГМУ), Кафедра гастроэнтерологии и эндоскопии.
Гастроэнтеролог
Доктор Медицинских Наук

Источники: http://meduniver.com/Medical/zabolevania_pecheni/ifa_v_diagnostike_gepatita.html, http://www.luxmama.ru/1/l48/analiz-krovi-na-gepatit-s/, http://lechupechen.ru/gepatit/diagnostika-gepatitov/

Комментариев пока нет!



Источник: hepc.nextpharma.ru


Добавить комментарий