Методы определения гепатита

Методы определения гепатита

Переезд склада в Европу.
Реализуем препараты от гепатита С в России по закупочной цене - ликвидация склада
Перейти на сайт

ВАЖНО! Для того, что бы сохранить статью в закладки, нажмите: CTRL + D

Задать вопрос ВРАЧУ, и получить БЕСПЛАТНЫЙ ОТВЕТ, Вы можете заполнив на НАШЕМ САЙТЕ специальную форму, по этой ссылке >>>

Содержание статьи:

Анализ на вирусную нагрузку при гепатите С

При диагностировании гепатита важно определить не только вид вирусного заболевания, но и степень его развития. Вирусная нагрузка при гепатите С как раз помогает сделать выводы о стадии развитии болезни, способах ее лечения и примерных прогнозах на выздоровление. Расскажем, как проводится такой анализ и можно ли его расшифровать самостоятельно.

Симптомы и причины развития гепатита С

Заражение гепатитом чаще всего происходит через кровь или во время незащищенного полового акта. В группе риска находятся наркоманы, а также люди, подвергшиеся переливанию зараженного биологического материала.

Развитие гепатита происходит постепенно, и на первых этапах человек может даже не замечать тревожные симптомы. Однако негативное воздействие на печень уже оказывается, что в будущем приводит к резкому снижению функциональных возможностей органа. Следующие симптомы свидетельствуют о развитии болезни:

  1. Тошнота или неконтролируемые позывы к рвоте.
  2. Сильная слабость, низкая работоспособность.
  3. Головные боли, а также неприятные ощущения в области правого подреберья.
  4. Отсутствие аппетита и проблемы с функционированием ЖКТ.
  5. Незначительное повышение температуры тела.

При гепатите С признаки желтухи возникают не сразу. Печень еще несколько месяцев может функционировать в прежнем режиме, но постепенно, по мере размножения вируса, самочувствие пациента все равно будет ухудшаться.

Если кожа начинает желтеть, покрываться сыпью или красноватыми пятнами разного размера, то речь определенно идет о развитии опасного заболевания. Изменить цвет могут и слизистые, в том числе и зрачки. Именно на этой стадии пациенты чаще всего и обращаются к врачу, упустив ранний период развития болезни, когда было проще всего справиться с нею.

Что такое вирусная нагрузка

Диагностирование гепатита проводится с использованием комплекса мер. Чаще всего врачи прибегают к следующим исследованиям:

  • биохимический анализ крови, который позволяет выявить увеличение уровня билирубина, а также печеночных ферментов, что свидетельствует о неполадках в работе органа;
  • УЗИ брюшной полости, благодаря которому удается заметить воспаление внутренних органов;
  • биопсия печеночной ткани, позволяющая наиболее точно поставить диагноз;
  • комплекс мер, направленных на определение вирусной нагрузки.

Вирусная нагрузка при гепатите С определяется с помощью измерения уровня вирусных рибонуклеиновых кислот в организме человека. Измеряется количество вирусных клеток в 1 мл крови, за счет чего удается сделать вывод о степени развития болезни и продуктивности используемых врачебных методик.

Современные врачи для оценки вирусной нагрузки при гепатите С нормы устанавливают всегда одинаковые. Во время обследования проводят как количественный, так и качественный анализ. Последний позволяет выявить наличие или отсутствие вирусных рибонуклеиновых кислот в крови. Если они присутствуют, то ставится диагноз.

Количественное исследование дает куда больше сведений. С его помощью врачи определяют, на какой стадии находится заболевание и как лучше осуществлять его лечение. Однако количественная нагрузка определяется лишь при условии концентрации вируса более чем 500 МЕ на мл крови.

Для определения вирусной нагрузки при гепатите С чаще всего используются следующие методики исследования:

  1. ПЦР-исследование, которое считается самым чувствительным из всех. Такой анализ позволяет выявить гепатит С даже при концентрации вируса, равной 50 МЕ на мл крови. Именно этот анализ используют для качественного исследования при постановке диагноза на ранних стадиях.
  2. Транскрипционная амплификация, которая также является довольно точным методом исследования.
  3. Метод Р-ДНК. Его чаще всего используют для выявления стадии развития недуга. С помощью данной методики удается заметить вирус при его концентрации не менее 500 МЕ на мл крови. Однако на ранних стадиях заболевания такая методика исследования не эффективна.

Важно понимать, что грамотную расшифровку данных способен провести только врач. Но в любом случае повышение концентрации вируса ни о чем хорошем не говорит. Обычно такие анализы свидетельствуют о прогрессе гепатита С и неэффективности используемых методик лечения.

Расшифровка анализа и нормы

Расшифровка анализа на вирусную нагрузку должна проводиться квалифицированным человеком, поскольку здесь важны точность и внимательность.

Примерные нормы концентрации вируса гепатита С:

  1. Если вирусная нагрузка находится в пределах 800 000 МЕ на мл крови, то речь идет о нормальном течении болезни.
  2. Если этот показатель повышается до 810 000 МЕ на мл крови и более, то речь идет о высокой вирусной нагрузке.
  3. Если концентрация падает до 600 000 МЕ на мл крови, значит, лечение дало результаты и болезнь начала постепенно отступать.

Обычно пациент получает расшифровку анализа крови через 5–7 дней после ее сдачи. Делать такой анализ придется через 4, 12 и 24 недели после начала лечения. Это необходимо для того, чтобы врач мог отследить состояние пациента и действенность терапии. Если концентрация вируса понижается, значит, лечение эффективно.

Иногда расшифровка показывает, что концентрация вируса рибонуклеиновой кислоты не падает, а, наоборот, растет. Это говорит о том, что лечение было подобрано неправильно и его необходимо срочно менять. Также количественный тест необходимо провести через полгода после вирусной терапии, чтобы убедиться, что заболевание находится в статусе ремиссии.

Иногда результаты такого исследования оказываются ложными. Возможно это в следующих случаях:

  • если человек подвержен развитию острой инфекции, исследование может показать ложный отрицательный результат;
  • при длительном хранении и замораживании биологического материала также может появиться ложный отрицательный результат;
  • ложный положительный возникает при наличии ревматоидного фактора;
  • аутоиммунные заболевания также приводят к ложному положительному результату.

Именно из-за сложности расшифровки заниматься трактовкой такого анализа должен исключительно профессионал.

Примерная схема лечения

Выяснив степень вирусной нагрузки и проанализировав показатели, врач прописывает противовирусную терапию. Цель ее заключается в том, чтобы остановить размножение вируса, предотвратить диффузные изменения. Следующие препараты в рамках медикаментозного лечения используются чаще всего:

  1. «Интерферон» совместно с иммунодепрессантами.
  2. «Рибавирин» и «Пегинтерферон».
  3. «Ламивудин» и «Ремантадин», которые используются при наличии противопоказаний к применению «Рибавирина».
  4. «Глутоксим» и «Имунофан», которые применяются в качестве иммуномодуляторов.
  5. «Фосфоглив» и «Эссенциале», которые назначаются в рамках противовирусной терапии.

Дозировка и длительность использования каждого препарата назначаются индивидуально. Пациент в одни дни может чувствовать себя нормально, а в другие — ощущать резкое ухудшение самочувствия.

В среднем медикаментозная терапия длится до полугода, и в течение этого срока пациент постоянно сдает кровь на анализ для определения вирусной нагрузки.

Помимо проведения медикаментозного лечения, необходимо придерживаться строгой диеты с отсутствием жирной и острой пищи в рационе. Табу накладывается на все разновидности алкоголя вне зависимости от крепости.

Полностью излечить гепатит С очень сложно, а случаи рецидива возможны даже при самом позитивном прогнозе. При отсутствии лечения пациенту практически наверняка придется столкнуться с циррозом и печеночной недостаточностью. Именно поэтому при обнаружении первых тревожных симптомов нужно обращаться к врачу.

К данной статье еще нет отзывов. Оставьте отзыв первым.

© 2017 | Все права защищены

Копирование материалов сайта разрешено только при наличии активной ссылки на источник.

Все представленные на сайте материалы носят ИСКЛЮЧИТЕЛЬНО ознакомительный характер. Решение о необходимости применения того или иного метода определяется врачом.

Источник: http://www.vrednye.ru/gepatit/c-virusnaya-nagruzka.html

Вирусная нагрузка и тяжесть заболевания гепатитом C: есть ли связь?

Е.И. Лакина, О.В. Масалова, А.А. Абдулмеджидова, А.А. Кущ,

НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН, Москва

Вирусный гепатит С является одной из главных причин хронических заболеваний печени. Первичная диагностика гепатита С осуществляется путем определения антител к белкам вируса гепатита С (ВГС) в сыворотках с использованием широко представленных на рынке тест-систем для иммуноферментного анализа (ИФА). Положительные результаты, полученные при скрининге сывороток, несут информацию о самом факте инфицирования, однако серологические методы не позволяют разграничить разрешившуюся острую инфекцию от хронического заболевания, а также оценить эффективность антивирусной терапии. В связи с этим для установления диагноза и характеристики активности хронического гепатита наряду с комплексным клиническим обследованием пациентов проводятся вирусологические исследования, направленные на определение прямых маркеров ВГС — РНК и вирусспецифических белков.

Патогенез гепатита С остается во многом неясным. До сих пор не существует однозначного ответа на вопрос, как присутствие вируса в организме влияет на развитие заболевания. Во многом это обусловлено тем, что исследователи этой проблемы получают противоречивые результаты. В этом обзоре мы постарались коротко изложить существующие в настоящее время опубликованные данные и результаты собственных исследований, касающиеся связи между присутствием РНК и белков ВГС в организме больных и активностью хронического гепатита С.

Для изучения распределения РНК вируса гепатита С в различных органах и тканях инфицированного организма применяют методы полимеразной цепной реакции с этапом обратной транскрипции (ОТ-ПЦР), гибридизации in situ, ПЦР in situ. Вирусные белки выявляют либо с помощью поликлональных сывороток, либо с помощью моноклональных антител.

Для оценки влияния вирусной нагрузки на активность хронического гепатита С, которая может варьировать от минимальных гистологических изменений в печени до случаев цирроза и гепатокарциномы, используют различные варианты количественного и полуколичественного методов ОТПЦР. Активность патологического процесса в печени оценивают по уровню активности фермента аланинаминотрансферазы (АЛТ), индексу гистологической активности (ИГА). Стадию заболевания характеризуют, используя гистологический индекс склероза (ГИС). Гистологический диагноз (ИГА и ГИС) ставится на основании морфологического изучения биопсийного материала печени и выражается в баллах в соответствии с международной классификацией (DesmetV.J. et al., 1994).

По данным ряда исследователей, репликация вируса возрастает по мере прогрессирования болезни (Cho S.W. et al., 1996), и более высокий уровень виремии коррелирует с более серьезным повреждением печени (Gretch D. et al., 1994). При исследовании парафиновых срезов печени Dries V. с соавт. (1999) отмечали более частое выявление РНК В ГС в печени пациентов с высоким уровнем воспалительной активности по сравнению со случаями, при которых повреждения печени были минимальны. По мнению авторов, это связано с тем, что вирусная нагрузка клеток печени может определять воспалительно-некротическую реакцию (Dries V. et al., 1999). По данным Jamal M.M. с соавт. (1999), у пациентов с постоянно нормальным уровнем АЛТ наблюдается значительно более низкий уровень РНК ВГС в печени, чем у больных с повышенным уровнем АЛТ. Adinolfi L.E. с соавт. (1998) указывают, что у пациентов с циррозом печени уровень РНК в печени превышает таковой у пациентов с низким уровнем ИГА (1-4). Наиболее высокий уровень РНК ВГС в печени наблюдается у больных с ИГА>8 (Adinolfi L.E.etal., 1998).

В противоположность этому большинство исследователей сходятся на том, что прямая связь между количеством РНК ВГС в организме (как в печени, так и в периферической крови) и степенью активности патологического процесса отсутствует (BallardiniG.etal., 1997, McGuinnesP.H. et al., 1996, Negro F. et al., 1998, 1999, Rodriguez-Inigo E.et al., 1999, Sugano M. et al., 1995). Поданным этих авторов, присутствие вируса в организме и уровень вирусной РНК не коррелируют со значениями ИГА, ГИС или АЛТ. Есть данные об уменьшении уровня вирусной РНК в печени при прогрессировании хронического гепатита С (Di MartinoetaL, 1997).

Результаты, полученные в нашей лаборатории, согласуются с последней концепцией: при исследовании материалов (ткани печени, сыворотки и лимфоцитов периферической крови) от 75 пациентов с хроническим гепатитом С не было обнаружено достоверных отличий между частотой выявления РНК ВГС у больных с различной активностью заболевания (Лакина Е.И. и др., 2000). При проведении нами количественного анализа уровня РНК ВГС в сыворотке крови больных ХГС (Amplicor Monitor Test, v.2.0., «Roche Diagnostics») также не выявлено значимой корреляции между показателями ИГА, ГИС, АЛТ и уровнем виремии.

В настоящее время в литературе активно обсуждается вопрос о роли лимфоцитов в развитии ВГС-инфекции. Результаты выявления РНК ВГС в мононуклеарах периферической крови больных гепатитом С, полученные разными исследователями, варьируют в широких пределах. Так, по данным одних авторов, РНК ВГС в мононуклеарах периферической крови встречается у 24% больных (Young K.S. et al., 1993), по данным других — у всех (100%) обследованных (MellorG. et al., 1998, OkumuraA. et al., 1998). Согласно нашим данным, РНК ВГС в лимфоцитах периферической крови выявляется в 64% случаев. Связи между наличием ВГС в лимфоцитах и активностью гепатита С не обнаружено.

Zignego A.L. с соавт. (1995) показали, что РНК вируса чаще встречается в клетках крови пациентов с более серьезными повреждениями печени. Для объяснения существования этой связи авторы предположили, что активная инфекция различных субпопуляций клеток, вовлеченных в иммунный ответ хозяина, может нарушать их функцию, приводя к персистенции ВГС и развитию хронических повреждений печени. Частое обнаружение РНК ВГС в периферических мононуклеарах больных с хроническими повреждениями печени может объясняться тем, что при длительной ВГС-инфекции клеток печени происходит увеличение пула инфицированных лимфоидных клеток путем передачи от клетки к клетке (Zignego et al., 1995). Показано, что инфицированные лимфоидные клетки могут быть причиной заражения здоровой печени, пересаженной в организм ВГС-инфицированного пациента (Feray С. et al., 1992). Внепеченочный резервуар инфекции может также служить источником реактивации болезни после прекращения интерферонотерапии (Gil В. et al., 1993).

При изучении вопроса о том, насколько уровень вируса в сыворотке отражает его количество в печени, данные исследователей расходятся. Тогда как одни авторы выявляют корреляцию между присутствием геномной РНК в печени и уровнем виремии (De Moliner L. et al., 1998, Mc Guinnes P.H. et al., 1996, Negro F. et al., 1999), другие (Ballardini G. et al., 1997) подобную связь отрицают. Martin с соавт. (1998) указывают на существование корреляции между количеством РНК ВГС в печени и в сыворотке крови, но не в периферических мононуклеарах. В работе Sugano M. с соавт. (1995) сообщается о положительной корреляции между уровнем РНК ВГС в печени и сыворотке крови до лечения интерфероном. После интерферонотерапии корреляция между количеством РНК в печени и в сыворотке не была обнаружена. Подсчет инфицированных клеток в печени после проведения гибридизации in situ показал, что число клеток, содержащих РНК ВГС, может колебаться от 4,8% до 87,6% у разных больных, и уровень виремии прямо зависит от числа инфицированных клеток в печени (Gosalvez J. et al., 1998, Lau G.K.K. et al., 1994, Rodriguez-Inigo E. et al., 1999). При сопоставлении частоты выявления РНК ВГС в печени и в сыворотке крови нами были получены результаты, согласно которым примерно в трети случаев возникает ситуация, когда при наличии вируса в печени РНК ВГС в сыворотке не выявляется: частота выявления РНК ВГС в печени составляет 86%, в сыворотке крови -51%. Эти результаты согласуются с данными других авторов (Haydon G.H. et al.„ 1998, Seidi S. et al., 1999). Например, в работе Haydon G.H. с соавт. (1998) геномная РНК ВГС выявлена в клетках печени 10 из 12 пациентов, негативных по этому показателю в сыворотке.

Жизненный цикл ВГС включает образование репликативных (минус-) цепей РНК, которые служат матрицей для образования геномных молекул. Частота выявления репликативной формы РНК ВГС по данным одних исследователей составляет 35% случаев (Gastaldi M. et al., 1995), тогда как по данным других до 100% (Okabe M. et al., 1997, Sansonno D. et al., 1997, Chang M. et al., 2000). Существенное расхождение данных может объясняться трудностями, возникающими при определении минус-РНК, так как количество негативных цепей РНК на один (lanford R.E. et al., 1995) — три (Mellor J. et al., 1998) порядка ниже, чем +РНК. Это объясняется тем, что одна молекула -РНК может служить матрицей для синтеза нескольких геномных молекул.

Среди исследователей нет единого мнения о том, насколько репликация вируса связана с процессами повреждения печени и выходом вирусных частиц в периферическую кровь (De Moliner L. et al., 1998. Negro F. et al., 1999). По данным Negro F. с соавт. (1998, 1999), использовавших полуколичественный метод PCR, нет строгой связи между вирусной репликацией и уровнем виремии. Согласно полученным нами данным, репликация вируса в печени сопровождается большей частотой выявления РНК ВГС в сыворотке крови, однако достоверной корреляции между этими параметрами не обнаружено. Несоответствие между количеством выявленных геномной и репликативной форм РНК ВГС в печени и уровнем виремии может быть следствием ряда причин: 1 — элиминации вируса из сыворотки с помощью специфических антител; 2 — поступления ВГС в периферическую кровь не только из печени, но и из других органов и тканей; 3 — нарушения процесса высвобождения вируса из клеток печени под действием лекарственных средств или других факторов (Negro F. et al., 1998). Опыты, проведенные в нашей лаборатории, не выявили достоверной корреляции между частотой встречаемости минус-РНК ВГС в печени и степенью поражения печеночной ткани (Лакина Е.И. и др., 2000). Это согласуется с предположением, что вирус может реплицироваться, не вызывая серьезных повреждений в ткани печени (Negro F. et al., 1998). Однако есть данные о возможном участии вирусной репликации в развитии цитопатического эффекта (Chang M. et al., 2000, Tsutsumi M. et al., 1994). С помощью метода гибридизации in situ показано, что клетки, содержащие репликативную форму РНК вируса, локализованы преимущественно в очагах поражения печени (Tsutsumi M. et al., 1994). Обнаружена достоверная корреляция между количеством гепатоцитов, содержащих репликативную форму РНК ВГС, и степенью воспаления печени. Следует отметить, что для геномной РНК ВГС авторы такой связи не выявили (Chang M. et al., 2000).

Согласно мнению большинства исследователей, хотя печень и является главным органом, где происходит вирусная репликация, ВГС может реплицироваться в периферических мононуклеарах, лимфатических узлах, поджелудочной железе, в меньшей степени — в костном мозге, селезенке, щитовидной железе и надпочечниках (Lerat Н. et al., 1996, Okumura A. et al., 1998, Gowans E.J., 2000, Grovatto M. et al., 2000, Radkoowski M. et al., 2000).

Наряду с определением РНК, перспективным методом изучения активности вирусной репродукции является выявление вирусных белков непосредственно в тканях с помощью иммуногистохимических методов (ИГХ). В качестве иммунных реагентов для детекции антигенов ВГС используются как моноклональные антитела (Ballardini G. et al., 1995, Gonzalez-Peralta R.P. et al., 1994, Noun-Aria K.T et al., 1995, Sansonno D. et al., 1995, Nayak N.C., SatharS.A., 1999), так и поликлональные антисыворотки, полученные от экспериментально иммунизированных животных (Gonzalez-Peralta R.P. et al., 1994, Tsutsumi M. et al., 1994) или больных хроническим гепатитом С людей (Ballardini G. et al., 1995, Nouri-Aria K.T. et al., 1995).

Большой интерес представляет вопрос о связи экспрессии вирусных белков с активностью патологических процессов в печени. Согласно большинству исследований, число гепатоцитов, содержащих вирусные антигены, не коррелирует ни со степенью гистологических изменений в печени, ни с показателями биохимической активности (Gonzalez-Peralta R.P. et al., 1994, Nayak N.C., Sathar S.A., 1999, Gowans E.J., 2000). С другой стороны, Hiramatsu N. с соавт. (1992) показали, что экспрессия антигенов ВГС в печени возрастала с увеличением степени поражения органа. Sansonno D., Damacco F. (1993), изучая печень больных острым гепатитом С, обнаружили топографическую связь между очагами воспаления и некроза с одной стороны и гепатоцитами, экспрессирующими антигены ВГС, — с другой. Однако при переходе болезни в хроническое состояние эта связь не обнаруживалась.

Мы изучали распределение антигенов нуклеокапсида, неструктурных белков NS3, NS4A и NS4B с помощью полученных нами МКА в клетках печени больных хроническим гепатитом С на криостатных срезах печени. Были использованы биопсийные материалы от больных с различной активностью гепатита С и на разных стадиях заболевания. Параллельно ткань печени анализировали методом RT-PCR на наличие геномной и репликативной цепей РНК ВГС. В целом, антигены ВГС обнаружены в печени 33 из 34 (97%) пациентов, имеющих геномную РНК в ткани печени. Уровень детекции белка нуклеокапсида составлял 53%, NS3 — 76%, NS4 — 81%. Репликативная форма РНК ВГС значительно чаще ассоциировалась с выявлением соrе-белка. При этом доля антиген-позитивных гепатоцитов варьировала в широких пределах от 1 до 90% у разных пациентов, составляя в среднем около 32%. У больных с ХГС обнаружены качественные и количественные различия в соотношении структурных и неструктурных белков ВГС в клетках печени. В целом, все исследованные белки накапливались в печени пациентов с более тяжелыми формами ХГС (Абдулмеджидова АГ. и др., 2000). Между антиген-содержащими клетками и очагами воспаления и некроза ткани печени топографической связи выявлено не было, что подтверждает ранее полученные данные (Sansonno D., Damacco F., 1993). Эти результаты свидетельствуют в пользу гипотезы об отсутствии прямого цитопатического действия ВГС.

Анализ внутриклеточной локализации вирусных белков методом ИГХ показал, что специфическое окрашивание наблюдается только в цитоплазме гепатоцитов, что согласуется с большинством опубликованных работ (Ballardini G. et al., 1997, Blight К. et al., 1994, Brody R.I. et al., 1998, Gonzalez-Peralta et al., 1994, 1995, Nouri-Aria K.T. et al., 1995, Sansonno D. et al., 1995 (a,b), 1997).

Большой интерес представляет использование моноклональных антител для выявления белка нуклеокапсида ВГС в сыворотках крови больных гепатитом С и доноров (Onto E. et al., 1996, Jolivet-Reynaud С. et al., 1998, Masalova O.V. et al., 1998). Подобные исследования наталкиваются на две основные трудности: низкая концентрация вируса и блокирование антигенов ВГС антителами в составе иммунных комплексов (Onto E. et al., 1996, Shiratori Y. et al., 1997). В нашей лаборатории разработан метод для количественного определения соге-белка, входящего в состав циркулирующих в плазме «свободных» вирионов и иммунных комплексов. При исследовании плазм от 80 антиВГС-позитивных доноров оказалось, что вирусная РНК выявляется только в половине образцов. В 94,4% РНК-позитивных плазм выявлен и белок нуклеокапсида ВГС. Концентрация белка core в разных образцах варьировала в широких пределах и составляла 5-850 пг/мл (Масалова О.В. и др., 2000). В сыворотках пациентов с ХГС (n=71) белок нуклеокапсида был обнаружен у 74% больных. Концентрация соге-белка не коррелировала с тяжестью заболевания Показано, что циркуляция ВГС в виде иммунных комплексов ассоциирована с более продвинутой стадией ХГС (согласно значениям ГИС) (Masalova O.V. et al., 2000). Тест-системы для ИФА на основе моноклональных антител, позволяющие определять белок нуклеокапсида не только на качественном, но и на количественном уровне, являются более простым и дешевым, чем ПЦР, методом выявления ВГС. Их внедрение в практику здравоохранения может существенно обогатить возможности современной диагностики и контроля за течением гепатита С.

Таким образом, несмотря на десятилетнее изучение вопроса о связи между присутствием вируса гепатита С в организме и прогрессированием хронического гепатита, многое по-прежнему остается неясным. Данные о роли вирусного генома и вирусных белков в патогенезе инфекции противоречивы. Необходимы дальнейшие исследования по комплексному анализу обоих компонентов иммунного распознавания: вируса (РНК, структурных и неструктурных белков) и иммунной системы хозяина (антител к ВГС, Т-клеток, цитокинов и иммунных комплексов). Эти знания необходимы для разработки эффективных средств профилактики и специфических препаратов для лечения гепатита С, что позволит контролировать это широко распространенное тяжелое заболевание человека.

* Работа поддержана РФФИ, проект № 01-04-48890

1. Абдулмеджидова А.Г, Лакина Е.И., Масалова О.В. и др. Изучение структурных и неструктурных белков вируса гепатита С (В ГС) в клетках печени пациентов с хроническим гепатитом С // В сб. «Гепатит С (Российский консенсус)». — Москва. — 2000.

2. Лакина Е.И., Самохвалов Е.И., Левченко О.Г. и др. Выявление позитивных (геномных) и негативных (репликативных) цепей РНК вируса гепатита С в сыворотке крови, лимфоцитах и ткани печени больных хроническим гепатитом С с помощью полимеразной цепной реакции // Вопр. вирусол. — 2000. — N4. — С. 37-41.

3. Масалова О.В., Самохвалов Е.И., Петракова Н.В. и др. Выявление маркеров вируса гепатита С — белка нуклеокапсида, РНК и вирусспецифических антител в плазмах крови доноров // Вопр. вирусол. — 2000. — N2. — С. 14-18. 4. Adinolfi L.E., AndreanaA., Utili R. et al. HCV RNA levels

in serum, liver, and peripheral blood mononuclear cells of chronic hepatitis С patients and their relationship to liver injury//Am. J. Gastroenterol. -1998. — V.93. — Nll.- P.2162-2166.

5. Ballardini G., Groff P., Giostra F. et al. Hepatocellular codistribution of C100, СЗЗ, С22, and NS5 hepatitis С virus antigens detected by using immunopurified polyclonal spontaneous human antibodies. // Hepatology. — 1995. — V. 21. -P.730-734.

6. Ballardini G., Manzin A., Giostra F. et al. Quantitative liver parametrs of HCV infection — relation to HCV genotypes, viremia and response to interferon treatment / / J. Hepatology. — 1997. — V.26. — N4. — P.779-786.

7. Blight K., Lesniewski R.R., Labrooy J.T, Gowans E.J. Detection and distribution of hepatitis C-specific antigens in naturally infected liver. // Hepatology. — 1994. — V. 20. — P. 553-557.

8. Brody R.I., Eng S., Melamed J. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis С antigen by monoclonal antibody TORDJI-22 compared with PCR viral detection. //Am. J. Clin. Pathol. -1998. — V.110. — Nl. -P.32-37.

9. Chamlian A., Benkoel L., Sahel J. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis С virus related С 100-3 and core antigens in formalin-fixed liver tissue. // Cell.Molec. Biology — 1996. — V. 42. — P. 557-566.

10. Chang M., MarquardtA-P, Wood B.L. et al. In situ distribution of hepatitis С virus replicative-intermediate RNA in hepatic tissue and its correlation with liver disease // J. Virol.-2000. — V.74. — N2. — P.944-955.

11. Cho S.W., Hwang S.G., Han D.S. et al. In situ detection of hepatitis С virus RNA in liver tissue using a digoxigenin-labeled probe created during a polimerase chain reaction / / J. Med. Virol. — 1996. — V.48. — N3. — P.327-333.

12. Dash S., Saxena R., Myung J. et al. HCV RNA levels in hepatocellular carcinomas and adjacent non-tumorous livers. //J. Virol. Meth. — 2000. — V.90. — Nl. — P. 15-23.

13. De Moliner L., Pontisso P., De Salvo G.L. et al. Serum and liver HCV RNA levels in patients with chronic hepatitis C: correlation with clinical and histological features // Gut. -1998.-V.42.-N5.-P.856-860.

14. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. et al. Classification of chronic hepatitis: diagnosis, grading and staging. // Hepatology -1994. — V.I 9. — P. 1513-1520.

15. Di Martino V., Saurini F., Samuel D. et al. Long-term longitudinal study of intrahepatic hepatitis С virus replication after liver transplantation//Hepatology- 1997. -V.26. — N5. -P. 1343-1350.

16. Doughty A.L., Painter D.M., McCaughan G.W. Nonspecificity of monoclonal antibody Tordji-22 for the detection of hepatitis С virus in liver transplantant recipients with cholestatic hepatitis. // Liver Transpl. Surg. — 1999. -V. -N1.-P.40-45.

17. Dries V., von Both I., Muller M. et al. Detection of hepatitis С virus in paraffin-embedded liver biopsies of patients negative for viral RNA in serum//Hepatology. -1999. — V.28. — Nl. -P.223-229.

18. Feray C., Samuel D., Thiers V. et al. Reinfection of liver graft by hepatitis C virus after liver transplantation. // J. Clin. Invest. — 1992. — V.89. -P. 1361-1366.

19. Gastaldi M., MassacrierA., Plannels R. et al. Detection by in situ gybridization of hepatitis C virus positive and negative RNA strands using digoxigenin-labeled cDNA probes in human liver cells // J. Hepatol. — 1995. — V.23. — N5. — P.509-518.

20. Gil В., Quian C., Riezu-Boj J.I. et al. Hepatic and extra-hepatic HCV RNA strands in chronic hepatitis C: different patterns of response to interferon treatment. // Hepatology -1993.-V.18.-P. 1050-1054.

21. Gonzalez-Peralta R. P., Fang J. W., Davis G. L. et al. Optimization for the detection of hepatitis C virus antigens in the liver. // J. Hepatol. -1994. — V. 20. — P. 143-147.

22. Gosalvez J., Rodriguez-Inigo E., Ramiro-Dias J. et al. Relative quantification and mapping of hepatitis C virus by in situ hybridization and digital image analysis // Hepatology. -1998.- V.27.-N5.-P.1428-1434.

23. Gowans E.J. Distribution of markers of hepatitis C virus infection throughout the body. // Semin. Liver Dis. — 2000. -V.20.-N1.-P.85-102.

24. Gretch D., Corey L., WilsonJ. et al. Acessment of hepatitis C virus RNA levels by quantitative competitive RNA polymerase chain reaction: high-titer viremia correlates with advanced stage of disease // J. Infect. Dis. — 1994. — V.I 69. -P.1219-1225.

25. Grovatto M., Pozzato S., Zorat F. et al. Peripheral blood neutrophils from hepatitis C virus infected patients are replication sites of the virus. // Haemotologica. — 2000. — V.85. — N4. -P.356-361.

26. Hiramatsu N., Hayashi N., Hurana Y. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis C virus-infected hepatocytes in chronic liver disease with monoclonal antibodies to core, envelope and NS3 regions of the hepatitis C virus genome. // Hepatology -1992. — V. 16. — N3. — P. 306- 311.

27. Jamal M.M., Soni A., Quinn P.G. et al. Clinical features of hepatitis C-infected patients with persistently normal alanine transaminase levels in the Southwesten United States // Hepatology. — 1999. — V.30. — N5. — P.1307-1311.

28. Jolivet-Reynaud C., Dalbon P., Viola F. et al. HCV core immunodominant region analysis using mouse monoclonal antibodies and human sera: characterization of major epitopes useful for antigen detection. // J. Med. Virol. — 1998. — V.56. -N4. — P.300-309.

29. Komminoth P., Adams V, Long A. et al. Evaluation of methods for hepatitis C virus detection in archival liver biopsies. Comparison of histology, immunihistochemistry, in situ hibridization, reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and in situ RT-PCR. // Pathol. Res. Pract. — 1994. -V.190.-P.1017-1025.

30. Lam N.P. Hepatitis C: natural history, diagnosis, and management.//Am. J. Health.Syst.Pharm.-1999.-V.56.-N10. -P.961-973.

31. Lanford R.E., Chaves D., Chisari F.V, Sureau C. Lack of detection of negative-strand hepatitis с virus RNA in peripheral blood mononuclear cells and other extrahepatic tissues by the highly strand-specific rTth reverse transcriptase PCR. // J. Virol. — 1995. — V.69. — N12. — P.8079-8083.

32. Laskus Т., Radkowski M., Wang L.F. et al. Uneven distribution of hepatitis C virus C quasi-species in tissues from subjects with end-stage liver disease — confounding effect of viral adsorption and mounting evidence for the presence of low-level extrahepatic replication. // J. Virol. — 2000. — V.74. — N2. -P.1014-1017.

33. Lau G.K.K., Fang J.V.C., Wu P.S. et al. Detection of hepatitis C virus genome in formalin-fixed parafin-embedded liver tissue by in situ reverse transcription polymerase chane reaction // J. Med. Virol. -1994. — V.44. — N5. — P.406-409.

34. Lerat H., Berby F., Trabaud M.A. et al. Specific detection of hepatitis C minus strand RNA in hematopoetic cells. // J. Clin. Invest. -1996. — V.97. — N3. — P.845-851.

35. Martin J., Navas S., Quiroga J.A. et al. Quantification of hepatitis C virus in liver and peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis C virus infection // J. Med. Virol. — 1998. — V.54. — N4. — P.265-270.

36. Masalova O.V, Atanadze S.N., Samokhvalov E.I. et al. Detection of hepatitis C virus core protein circulating within different virus particle population. // J. Med. Virol.- 1998. -V.55.-P.1-6.

37. Masalova O.V, Vishnevskaya TV, Lakina E.I. et al. Quantitative detection of hepatitis C core protein circulating within virions and immune complexes in serum of HCV-infected patients. // J. Clin. Virol. — 2000. — V.18. — N.1-3. -P.81-82.

38. Mc Guinnes PH., Bishop G.A., Painter D.M., Chan R. Intrahepatic hepatitis C RNA levels do not correlate with degree of liver injury in patients with chronic hepatitis С // Hepatology — 1996. — V.23. — N4. — P.676-687.

39. Mellor J., Haydon G., Blair C. et al. Low level or absent in vivo replication of hepatitis C virus and hepatitis G virus / GB virus C in peripheral blood mononuclear cells. // J. Gen. Virol. -1998. — V.79. — N4. — P.705-714.

40. Muratori B.L., Gibellini D., Lenzi M. et al. Quantification of hepatitis C virus infected peripheral blood mononuclear cells by in situ reverse transcriptase chain reaction. // Blood. -1996. — V.88. — N7. — P.2768-2774.

41. Nayak N.C., Sathar S.A. Immunohistochemical detection of hepatitis C virus antigen in paraffin embedded liver biopsies from patients with chronic liver disease. // Acta Histochem. — 1999.-V.101.-N4.-P.409-419.

42. Negro F, Giostra E., Krawczynski K. et al. Detection of intrahepatic hepatitis С virus replication by strand-specific semi-quantitative RT-PCR: preliminary application to the liver transplantation model //J. Hepatol. -1998. — V.29. — P.l-11.

43. Negro F., Krawczynski K., Quadri R. et al. Detection of genomic- and minus-strand of hepatitis С virus RNA in the liver of chronic hepatitis С patients by strand-specific semi-quantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction // Hepatology. — 1999. — V.29. — P.536-542.

44. Nouri Aria K.T, Sallie R., Sangar D. et al. Detection of genomic and intermediate replicative strands of hepatitis С virus in liver tissue by in situ hybridization // J. Clin. Invest. -1993. — V.91. — N5. — P.2226-2234.

45. Nouri-Aria K.T, Sallie R., Mizokami M. et al. Intrahepatic expression of hepatitis С virus antigens in chronic liver disease. //J. Pathol. — 1995. — V.I 75. — P.77-83.

46. Okabe M., Fukuda K., Arakawa K., Kikuchi M. Chronic variant of myocarditis associated with hepatitis С virus infection // Circulation. — 1997. — V.96. — N1. — P.22-24.

47. OkumuraA., Yoshioka K., AiyamaT. et al. Different constitution of hepatitis С virus population in peripheral blood mononuclear cells and plasma in patients with type С chronic liverdisease. // Dig. Dis. Sci. -1998. — V.43. — N2. — P.377-383.

48. Onto E., Mizokavi M., Tanaka T. et al. Quantification of serum hepatitis С virus core protein level in patients chronically infected with different hepatitis С genotypes. // Gut. -1996.-V.39.-P.876-880.

49. Sansonno D., Dammacco F. Hepatitis С virus с 100 antigen in liver tissue from patients with acute and chronic infection. //Hepatology. — 1993.-V.18. — P.240-245.

50. Sansonno D., Comacchiulo V, lacobelli A.R. et al. Localization of hepatitis С virus antigens in liver and skin tissues of chronic hepatitis С virus-infected patients with mixed cryoglobulinemia. // Hepatology. — 1995. — V.21. — P.305-312.

51. Sansonno D., lacobelli A.R., Comacchiulo V. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis С virus-related proteins in liver tissues. // Clin. Exp. Rheumatol. — 1995. -V.13.-S29-S32.

52. Sansonno D., Comacchiulo V, Racanelli V, Damacco F. Insimultaneous detection of hepatitis С virus RNA and hepatitis С virus-related antigenes in hepatocellular carcinoma // Cancer. -1997. — V.80. — N1. — P.22-33.

53. Seidi S., Koenig В., Reinhardt G. et al. Higher detection rate of hepatitis G and С virus RNA in liver tissue than in serum of deceased injection drug users // Int. J. Legal. Med. -1999.-V.112.-N1.-P.35-38.

54. Shiratori Y., Kato N.. Yokosuka O. et al. Quantitative assays for hepatitis С virus in serum as predictors of long-term response to interferon. // J. Hepatol. — 1997. — V.27. — P.437-444.

55. Sugano M., Hayashi J., Joon S. et al. Quantification of hepatitis С viral RNA in liver and serum samples using competitive polymerase chain reaction//J. Clin. Pathol. — 1995. -V.48. — N8. -P.820-825.

56. Radkowski M., Kubicka J., Kisiel E. et al. Detection of active hepatitis С vims and hepatitis G virus/GB virus С replication in bone marrow in human subjects. // Blood. — 2000. -V.95.-N12.-P.3986-3989.

57. Rodriguez-Inigo E., Bartolome J., de Lucas S. et al. Histological damage in chronic hepatitis С is not related to the extent of infection in the liver//Am. J. Pathol. — 1999. — V.I 54. -N6.-P.1877-1881.

58. Tsutsumi M., Urashima S., Takada A. et al. Detection of antigens related to hepatitis С vims RNA encoding the NS5 region in the livers of patients with chronic type С hepatitis. // Hepatology. — 1994. — V.19. — N2. — P.773-778.

Источник: http://medi.ru/info/3050/

Вирусная нагрузка при ВИЧ и гепатите С: показатели

Одним из страшных заболеваний современности является вирус иммунодефицита человека (ВИЧ). К сожалению, с каждым годом число заразившихся людей увеличивается. Ранее считалось, что ВИЧ распространен среди наркоманов и гомосексуалистов. В настоящее время заболевание встречается у людей из различных слоев населения. В том числе среди новорожденных детей. Конечной стадией патологии считается синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). Чтобы не довести заболевание до тяжелой степени, необходимо постоянно наблюдать за пациентами и корректировать лечение. С этой целью проводится такой анализ, как вирусная нагрузка. Она позволяет оценить стадию болезни. Кроме того, данный тест выполняется для того, чтобы определить дальнейшую тактику лечения.

Для чего проводят вирусную нагрузку?

Как известно, вирусы состоят из молекул ДНК или РНК. Нуклеиновые кислоты составляют генетический материал. Вирусная нагрузка – это анализ, который проводится, чтобы определить количество РНК возбудителя в крови. Данное исследование можно выполнять при различных патологических состояниях. Среди них – ВИЧ, гепатиты В и С, герпетическая, цитомегаловирусная инфекция и т. д. Благодаря этому анализу определяется не только количество генетического материала в крови, но и стадия заболевания. То есть вирусная нагрузка является мерой тяжести патологии. Расчет проводится путём вычисления копий РНК в 1 мл плазмы крови. Определить вирусную нагрузку можно только в специальных лабораториях. Существует несколько методик выполнения данного исследования. Наиболее распространённым считается полимеразная цепная реакция (ПЦР). Благодаря анализу удаётся выявить, насколько быстро прогрессирует патологический процесс. С помощью него подбирается дозировка лекарственных средств, а также определяется прогноз заболевания.

Определение иммунного статуса при ВИЧ

Вирусная нагрузка при ВИЧ помогает исследовать иммунный статус пациента. У больных этот показатель снижен. Благодаря определению иммунного статуса можно судить о состоянии защитных сил организма. Данный показатель включает в себя совокупность количественных и качественных характеристик. Чтобы определить иммунный статус человека, проводится несколько последовательных этапов. Среди них:

  1. Сбор жалоб и анамнеза. Выясняется частота заболеваемости инфекционными патологиями (ОРВИ, герпес, грибковые поражения), реакция на прививки, лекарственные вещества.
  2. Определение в крови количества иммунных клеток. К ним относятся лейкоциты, лимфоциты, моноциты и гранулоциты.
  3. Выполнение специальных лабораторных тестов. Среди них – анализ на вирусную нагрузку.

Далее проводится иммунологический этап. Он включает определение содержания Т- и В-лимфоцитов, иммуноглобулинов, рецепторов иммунных клеток. При ВИЧ особое значение придаётся концентрации в крови CD4. Это рецепторы защитных клеток – Т-хелперов. Именно они поражаются вирусом иммунодефицита. После проведения всех этапов выполняется анализ информации. Таким образом, врач делает заключение об иммунном статусе.

Вирусная нагрузка при ВИЧ: показатели. Норма и патология

При ВИЧ-инфекции в иммунном статусе наблюдаются выраженные изменения. Исследование на вирусную нагрузку позволяет определить, заражен человек или нет. В норме генетического материала возбудителя (РНК) в организме быть не должно. То есть у здорового человека количество вирусных частиц равно нулю. В ряде случаев этот показатель может быть несколько повышен. К примеру, если человек имеет врожденные иммунные патологии, тяжелые заболевания почек или эндокринных желез. Тем не менее вирусная нагрузка при ВИЧ отличается от этих показателей, наблюдающихся при других недугах. В случае синдрома иммунодефицита она будет значительно выше. Как определить стадию заболевания с помощью данного исследования? Какие имеет вирусная нагрузка при ВИЧ показатели? Норма составляет менее 20 тысяч копий в 1 мл крови. Если полученное значение выше, это означает, что необходимо менять схему лечения. Показатель вирусной нагрузки более 500 тысяч копий ВИЧ в 1 мл сыворотки крови говорит о запущенной стадии болезни (СПИД).

Благодаря данному методу исследования врач судит о том, как развивается патология. С внедрением в практику теста на вирусную нагрузку ученые доказали, что такое заболевание, как ВИЧ-инфекция, не стоит на месте. Назначение антиретровирусной (АРТ) терапии позволяет снизить репликацию РНК возбудителя. Такие исследования, как иммунный статус и вирусная нагрузка, имеют решающее значение не только в лечении, но и для прогноза заболевания. Если количество копий ВИЧ в 1 мл крови превышает 100 тысяч, то это свидетельствует о терминальной стадии патологии. Внедрение данного анализа позволило контролировать вирус иммунодефицита человека. Его проводят не только больным, но и детям, рожденным от зараженных матерей, а также здоровым людям при подозрении на возможное инфицирование.

Вирусная нагрузка: норма при гепатите С

Ещё одной распространённой и опасной патологией считается гепатит С. Это заболевание называют «медленным убийцей», так как оно поражает организм в течение многих лет. На протяжении длительного времени гепатит С никак не проявляется. Поэтому зачастую человек даже не подозревает о том, что заражен этим страшным вирусом. Возбудитель попадает в организм парентеральным путём, то есть через кровь. В большинстве случаев это происходит при проведении медицинских манипуляций (стоматологических, гинекологических, косметических процедур). Также патология встречается у людей, употребляющих инъекционные наркотические вещества.

Вирусная нагрузка при гепатите С показана всем больным. Как и в случае инфицирования ВИЧ, она помогает определить количество генетического материала возбудителя в крови. В норме копии вируса должны отсутствовать. Проведение теста у больных людей позволяет выявить, насколько человек опасен для окружающих, а также оценить результаты лечения. При обнаружении патологии на раннем этапе возможно выздоровление. Чтобы убедиться в эффективности терапии, выполняют исследование вирусной нагрузки. Подобное исследование проводится при выявлении антигенов к ВГС.

Расшифровка анализа вирусной нагрузки при гепатите С

Вирусная нагрузка при гепатите С измеряется в МЕ/мл. Низкое содержание возбудителя в организме свидетельствует об адекватности лечения и хорошем прогнозе. При этом показатель будет находиться в пределах от 600 до 3*10 4 единиц в 1 мл сыворотки крови. Если он превышает данное значение, то следует менять схему лечения. При увеличении копий РНК до 8*10 4 МЕ/мл результат оценивается как средняя виремия. В случае когда данный показатель выше, выставляется диагноз «гепатит С тяжёлой степени». При этом наблюдается поражение внутренних органов, проявляющееся клинически. Данная стадия болезни является терминальной.

Как часто необходимо проводить тест на вирусную нагрузку?

Исследование на вирусную нагрузку выполняют при обнаружении антител к вирусу гепатита С или ВИЧ. Кроме того, анализ выполняется всем больным, находящимся на диспансерном учете с данными патологиями. Сроки проведения вирусной нагрузки зависят от состояния пациента. Анализ выполняют 1 раз в год при стабилизации самочувствия. Если больной принимает противовирусные препараты, то оценка эффективности лечения должна проводиться каждые 3 месяца. Также анализ выполняют при ухудшении общего состояния пациента.

Методики проведения теста на вирусную нагрузку

Вирусная нагрузка проводится 3 способами. Чаще всего выполняется метод ПЦР. Он позволяет выявить антитела к вирусу. Также выполняют метод разветвленной ДНК. Этот тест менее чувствителен. Его проводят в качестве скрининга, а также с целью подтвердить диагноз (но не для коррекции лечения). Ещё одним точным и доступным способом выявления РНК возбудителя является метод транскрипционной амплификации.

Погрешности при проведении вирусной нагрузки

Несмотря на то что все методы определения вирусной нагрузки достаточно эффективны, неверный результат возможен. Погрешности в анализе наблюдаются при неправильном заборе крови, её загрязнении, а также нарушении условий хранения. Ложноотрицательный результат может быть в первые месяцы после заражения вирусом. Поэтому при подозрении на инфицирование исследование необходимо повторить через полгода.

Где можно сдать анализ на определение вирусной нагрузки?

Исследование на вирусную нагрузку проводят в специальных лабораториях, где имеется необходимое оборудование. Аппаратами для проведения ПЦР оснащены СПИД-центры, а также некоторые частные диагностические центры.

Источник: http://fb.ru/article/290222/virusnaya-nagruzka-pri-vich-i-gepatite-s-pokazateli

Source: medicinavdome.ru

Читайте также



Источник: hepc.nextpharma.ru


Добавить комментарий