Пцр в режиме реального времени гепатит

Пцр в режиме реального времени гепатит

Переезд склада в Европу.
Реализуем препараты от гепатита С в России по закупочной цене - ликвидация склада
Перейти на сайт

ВАЖНО! Для того, что бы сохранить статью в закладки, нажмите: CTRL + D

Задать вопрос ВРАЧУ, и получить БЕСПЛАТНЫЙ ОТВЕТ, Вы можете заполнив на НАШЕМ САЙТЕ специальную форму, по этой ссылке >>>

Содержание статьи:

HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HCV, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5×10 2 – 1,0×10 8 копий/мл образца.

Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК.

Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood, HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA Quant.

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания. HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро – с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой). У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и является методом диагностики заболевания. Генетический материал вируса можно обнаружить с помощью ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений.

Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения. При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается. Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса. Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

Для чего используется исследование?

  • Для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С».
  • Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
  • Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

  • При качественном обнаружении РНК вируса гепатита С.
  • При остром и хроническом вирусном гепатите С.
  • При микст-гепатитах.
  • При планировании, во время и после окончания противовирусной терапии.
  • Не обнаружено – РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (200 копий/мл = 40 МЕ/мл).
  • копий/мл ( МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена. Низкая виремия (наиболее благоприятный прогноз течения заболевания и эффективности терапии).
  • > 2*10^6 копий/мл (>8*10^5 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена. Высокая виремия.
  • >1,0*10^8 копий/мл (>2,4*10^7 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.

Линейный диапазон концентраций РНК вируса гепатита С, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5*10^2 – 1,0*10^8 копий/мл (1,8*10^2 – 2,4*10^7 МЕ/мл).

Что может влиять на результат?

Недостоверный результат может быть получен при:

  • загрязнении биоматериала;
  • наличии в образце ингибиторов – химических и белковых субстанций, влияющих на различные компоненты ПЦР;
  • присутствии в крови гепарина.
  • Уровень вирусной нагрузки крови не указывает на степень повреждения печени и тяжесть заболевания. Для их оценки необходимо исследовать биохимические показатели и материалы биопсии.
  • При планировании лечения очень важно определить генотип вируса гепатита С.

Кто назначает исследование?

  • Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000. – Т.1.: 600-690.
  • Кишкун А.А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. — М.:ООО МИА, 2006. – 471-476 с.
  • Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16 th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
  • Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, and others. In vivo tropism of hepatitis C virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype. Blood. 1998 May 15;91(10):3841-9.PMID:9573022.
  • Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. 2011 Jul 11;8:346. doi: 10.1186/1743-422X-8-346. PMID:21745397.
Подписка на новости

Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed

Медицинские офисы KDLmed

  • КЛИНИКА 1
  • КЛИНИКА 2
  • КЛИНИКА 3

г. Пятигорск, проспект 40 лет Октября, 62/3

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 15:30

г. Пятигорск, проспект 40 лет Октября, 14

С 14 декабря 2017 года офис работает до 18:00

сб 7:30 — 15:00 / вс 8:30 — 13:00

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 15:30

сб 7:30 — 14:00, вс 8:30 — 12:00

г. Пятигорск, ул. Адмиральского, 6А

Взятие мазков: пн-пт 7:30 — 16:00

г. Ставрополь, ул. Ленина, 301

сб 7:30 — 14:00 / вс 8:30 — 13:00

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 16:00

сб 7:30 — 13:00, вс 8:30 — 12:00

  • КЛИНИКА 1
  • КЛИНИКА 2

г. Невинномысск, ул. Гагарина, 19

сб 7:30 — 13:00 / вс 8:30 — 13:00

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 16:00

сб 7:30 — 11:00, вс 8:30 — 11:00

г.Невинномысск, ул. Гагарина, 60

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 16:00

г. Нефтекумск, 1-й микрорайон, ул. Дзержинского, 7

Взятие крови: пн-сб 7:30 — 9:30

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 14:00

г. Буденновск, пр. Энтузиастов, 11-Б

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 14:00

г. Зеленокумск, ул. Гоголя, д.83

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 16:00

г. Минеральные Воды, ул. Горская, 61, 13/14

сб 7:30 — 13:00 / вс 8:30 — 13:00

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 16:00

сб 7:30 — 13:00, вс 8:30 — 11:30

г. Ессентуки, ул. Володарского, 32

сб 7:30 — 13:00 / вс 8:30 — 13:00

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 16:00

сб 7:30 — 11:30 / вс 8:30 — 11:30

г. Георгиевск, ул. Ленина, 123/1

сб 7:30 — 13:00 / вс 8:30 — 13:00

Взятие мазка: пн-пт 7:30 — 15:30

сб — вс 7:30 — 11:30 / вс 7:30 — 11:30

г. Благодарный, ул. Первомайская, 38

Взятие мазков: пн-пт 7:30 — 16:00

г. Светлоград, ул. Пушкина, 19 (Центр, Собор)

Взятие мазков: пн-пт 7:30 — 16:00

с. Донское, ул. 19 Съезда ВЛКСМ, 4 А

Взятие мазков: пн-пт 7:30 — 16:00

г. Новоалександровск, ул. Гагарина, 271 (пересечение с ул. Пушкина)

Взятие мазков: пн-пт 7:30 — 16:00

с. Александровское, ул. Гагарина, 24

Взятие мазков: пн-пт 7:30 — 16:00

с. Кочубеевское, ул. Братская, 98 (ТЦ «ЦУМ»)

Источник: http://kdlmed.ru/doctors/analyzes/hcv-rnk-kolichestvenno-real-taym-ptsr/

Вирус гепатита С, определение РНК кол. (HCV-RNA, quantitative)

Вирус гепатита С (HCV) — РНК-содержащий вирус размером вириона 30-60 нм. Главным образом передается парентеральным путем (через инфицированную кровь и её компоненты). Инфицирование возможно при парентеральных манипуляциях, в том числе в медицинских учреждениях, включая оказание стоматологических услуг, через инъекционное оборудование, при акупунктуре, пирсинге, нанесении татуировок, при оказании ряда услуг в парикмахерских. Главная особенность вируса гепатита С – его генетическая изменчивость, выраженная способность к мутациям. Известно 6 основных генотипов вируса гепатита С. Однако, благодаря мутационной активности вируса, в организме человека могут присутствовать около четырех десятков подвидов HCV , в рамках одного генотипа. На территории РК преимущественно распространенны генотипы 1b, 2 и 3. Это один из важных факторов, определяющих персистенцию вируса и высокую частоту развития хронических форм гепатита С.

Иммунная система человека просто не в состоянии контролировать выработку нужных антител — пока вырабатываются антитела на одни вирусы – уже образуются их потомки с иными антигенными свойствами.

Для постановки диагноза используют комплексный подход, ключевую роль в котором играют лабораторные исследования.

Первый анализ, который обычно рекомендуют сделать – это определение антител к вирусу гепатита С (анти-HCV). Этот анализ устанавливает только факт инфицирования в настоящем или прошлом. Кроме того, этот анализ может давать ложно-положительные (анализ положительный, но инфекции на самом деле нет) и ложно-отрицательные результаты (анализ отрицательный, но инфекция на самом деле есть), по разным причинам.

Поэтому для точной диагностики гепатита С выполняется более сложное обследование для определения наличие РНК вируса гепатита С в крови. В настоящее время для этой цели используется качественное определение РНК вируса гепатита С (HCV RNA) с помощью высокочувствительной ПЦР диагностики в режиме реального времени с нижним лимитом определения 15 МЕ/мл с использованием автоматизированных систем закрытого типа. Для сравнения применяемые ранее анализаторы имели порог чувствительности 300 МЕ/мл. Таким образом, оно подтверждает как наличие инфекции, так и факт репликации (размножения) вирусов в организме. Количество вирусов в крови (вирусная нагрузка) позволяет судить об активности или скорости размножения вирусов.

Чем выше вирусная нагрузка, тем активнее репликация вирусов. Высокая вирусная нагрузка – это фактор, ухудшающий эффективность противовирусной терапии. Чем ниже вирусная нагрузка, тем выше шансы успешного излечения.

Кроме того, если содержание вируса высокое, то больной с большей вероятностью может заразить других лиц (половых партнеров, членов семьи).

В целом, вирусологическая диагностика проводится исходя из следующих принципов:

?1. Определение anti-HCV – первая линия диагностики ВГС (рекомендация А1).

?2. В случае подозрения на острый ВГС или у иммуносупрессивных пациентов необходимо определение HCV RNA (рекомендация А1).

?3.Если тест на anti-HCV положительный, необходимо определить HCV RNA чувствительным молекулярным методом (рекомендация А1).

?4. Пациенты с положительным тестом anti-HCV и отрицательным молекулярным тестом на HCV RNA должны быть протестированы на HCV RNA через 3 месяца для подтверждения элиминации вируса (рекомендация А1).

  1. Подозрения на острый вирусный гепатит С;
  2. Определение HCV RNA у пациентов с иммуносупрессией;
  3. Положительный результат anti-HCV;
  • РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода. Встречается при:

— выздоровевшие пациенты после перенесенного гепатита С;

— отсутствие гепатита С.

*Остальные числовые результаты, в том числе и более 1,00*10^8 МЕ/указывают на наличие вируса гепатита С.

Внимание! Интерпретацию результатов дает только лечащий врач, имеющий полную информацию о пациенте.

Источник: http://www.kdlolymp.kz/services/virus-gepatita-s-opredelenie-rnk-kol-hcv-rna-quantitative

МЕДИЦИНСКИЕ АНАЛИЗЫ

Опыт более 20 лет !

( 831 ) 412-96-22

Количественное определение вирусного гепатита С методом ПЦР в режиме «реального времени».

Молекулярно — биологические мето­ды диагностики.

Ведущую позицию в лабораторной диагностике HCV зани­мают молекулярно-биологические ме­тоды, позволяющие установить факт инфицированности; на­личие показаний к противовирусному лечению; выбрать оптимальную схе­му лечения; своевременно оценить эффективность проводимого лечения и оценить устойчивый ответ на ле­чение.

Диагностическая значимость качественных методов обнаружения РНК HCV:

1) выявление РНК HCV с помощью молекулярно-биологических методов (прежде всего с использованием ПЦР) применяется для ранней диагностики острого вирусного гепатита С.

РНК HCV появляется в плазме крови через 3 дня после заражения. У пациентов РНК HCV в детектируемых уровнях обнаруживается в плазме крови в среднем к 11 дню после заражения. Это позволя­ет диагностировать острый гепатит С задолго до сероконверсии, что особен­но важно для наиболее ранней диагно­стики и проверки донорской крови;

2) для оценки эффективности прово­димого противовирусного лечения используется качественное выявление РНК HCV в плазме крови в процессе проводимого лечения и по окончанию лечения. Для этой цели используются качественные тест-системы, обладаю­щие высокой чувствительностью;

3) для оценки устойчивого ответа на лечение используется качественное выявление РНК HCV в плазме крови через 24 недели после окончания ле­чения.

Диагностическая значимость генотипирования вируса гепатита С.

Наи­более важным фактором, от которого зависит эффективность противовирус­ного лечения, является генотип виру­са гепатита С. Согласно современной классификации HCV подразделяют на 6 генотипов, каждый из которых, в свою очередь подразделяется на некоторое количество субтипов. Генотип вируса обозначается арабскими цифрами, а субтип — строчными латинскими бук­вами.

В ряде работ было показано, что генотип 1 HCV хуже отвечает на проти­вовирусное лечение, чем другие гено­типы вируса. Это явилось основой для разработки различных рекомендаций по лечению для пациентов с генотипом 1 и генотипами 2 или 3.

Данных, касающихся генотипов 4, 5 и 6 опубликовано мало, хотя эти гено­типы часто встречаются в регионах с высокой пораженностью HCV. Генотип 4 наиболее часто выявляется в Египте и Африке, генотип 5 — в Южной Аф­рике, генотип 6 — в Юго-Восточной Азии. Таким образом, генотип HCV является важным фактором, опреде­ляющим эффективность противови­русного лечения, а, следовательно, и его тактику.

Диагностическая значимость ко­личественной оценки уровня РНК HCV в плазме крови.

В настоящее время вирусная нагрузка при HCV из­меряется в международных единицах на мл — МЕ/мл или в копиях РНК HCV на мл. В случае необходимости предоставления результата в копиях РНК HCV на мл, значение, полученное в МЕ/мл, умножают на 4 (МЕ HCV/мл *4 = РНК HCV копий/мл).

В современных иссле­дованиях границей между высокой и низкой вирусной нагрузкой HCV при­нято считать 600 ООО МЕ/мл. Однако согласно последним исследованиям Zeuzem за границу между высокой и низкой вирусной нагрузкой HCV сле­дует принимать 400 ООО МЕ/мл.

Хотя в большинстве исследований было показано, что степень поражения пече­ни при HCV не зависит от вирусной на­грузки, пациенты с высокой вирусной нагрузкой до лечения хуже отвечают на противовирусную терапию препаратами интерферона.

Низкая вирусная нагрузка ( 600 000 МЕ/мл) значительно хуже отвечают на лечение, чем пациен­ты с генотипом 2 или генотипом 3 и низ­кой вирусной нагрузкой и, возможно, требуют более длительного лечения.

Использование количественной оцен­ки уровня РНК HCV в плазме крови при противовирусном лечении больных, инфицированных 1 генотипом HCV, применяется для мониторинга эффек­тивности лечения, что отражено в консенсусном мнении международных экспертов по лечению HCV

Материал подготовлен: МЦ «Наследственность» г. Нижний Новгород, май 2008 г. Согласно

Инструкции по применению тест – системы для количественного определения РНК вируса гепатита С методом ПЦР в режиме «реального времени»; Москва, 2008 г., ФГУН «ЦНИИ Эпидемиологии» Роспотребнадзора.

Источник: http://www.nasled.com/?id=280

Source: kakvylechit.ru

Читайте также



Источник: hepc.nextpharma.ru


Добавить комментарий