Поверхностный антиген гепатита в hbsag

Поверхностный антиген гепатита в hbsag

Переезд склада в Европу.
Реализуем препараты от гепатита С в России по закупочной цене - ликвидация склада
Перейти на сайт

Performance evaluation of 70 hepatitis B virus (HBV) surface antigen (HBsAg) assays from around the world by a geographically diverse panel with an array of HBV genotypes and HBsAg subtypes
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2860763/

Повторное использование этой статьи разрешено в соответствии с Соглашением Creative Commons, Attribution 2.5, которое не разрешает коммерческую эксплуатацию.

Это исследование было проведено Международным консорциумом по безопасности крови (ICBS) для выявления высококачественных тест-наборов для обнаружения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBVA) в интересах развивающихся стран.

Испытательные комплекты 70 HBsAg со всего мира были оценены сравнительно по их клинической чувствительности, аналитической чувствительности, чувствительности к генотипам HBV и подтипам HBsAg и специфике с использованием 394 (146 клинических, 48 аналитических и 200 отрицательных) членов IC Panel Master Panel различного географического происхождения включающий основные генотипы HBV AF и подтипы HBsAg adw2,4, adr и ayw1-4.

Семнадцать наборов иммуноферментных анализов HBsAg (EIA) имели высокую аналитическую чувствительность 1 МЕ / мл значительно снижает длительность положительного периода HBsAg, что делает их менее надежными для выявления HBsAg при бессимптомной инфекции HBV. Сниженная чувствительность к HBsAg с генетическим разнообразием HBV происходила с генотипами / подтипами D / ayw3, E / ayw4, F / adw4 и мутантами гена S. Специфичность анализов HBsAg составляла ≥99 · 5% в 57 наборах тестов и 96 · 4-99 · 0% в оставшихся наборах тестов.

Диагностическая эффективность оцениваемых наборов тестов HBsAg существенно различалась. Поэтому лаборатории должны знать об аналитической чувствительности к HBsAg и проверять наличие соответствующих вариантов HBV, циркулирующих в соответствующей популяции.

Вирус гепатита B (HBV) является наиболее распространенной хронической вирусной инфекцией во всем мире. Приблизительно два миллиарда человек во всем мире страдают, и около 350 миллионов человек имеют активную хроническую инфекцию HBV [1,2]. В сильно эндемичных областях, таких как Восточная и Юго-Восточная Азия, Африка к югу от Сахары и части Южной Америки, более 8% населения являются хроническими носителями HBV [1]. 80% взрослых с хронической инфекцией HBV не будут иметь никаких указаний на то, что они были инфицированы. Из-за часто молчаливого характера заболевания тестирование на ВГВ является обязательным для общественного здравоохранения, особенно для скрининга крови. Неоткрытые острые инфекции и хронические носители с низким уровнем виремии облегчают распространение HBV. Поверхностный антиген гепатита В (HBsAg) является ключевым маркером для скрининга и лабораторной диагностики инфекции HBV и первого серологического маркера, который появляется во время инфекции HBV. Чувствительность HBsAg зависит от порога обнаружения иммунологических анализов. Чем ниже предел обнаружения HBsAg, тем меньше диагностическая «фаза окна» в ранней инфекции [3,4] и тем выше вероятность обнаружения наименьших количеств HBsAg у бессимптомных пациентов и хронических носителей [5]. Таким образом, нормативные требования для HBsAg выражаются как минимальная аналитическая чувствительность к определенной контрольной стандартной концентрации HBsAg [6,7]. Из-за генетического разнообразия HBV чувствительность анализов HBsAg также может зависеть от антигенного изменения HBsAg. Фактически, некоторые мутанты HBsAg, которые появляются после отбора с помощью иммунного давления, могут избежать обнаружения коммерческими анализами HBsAg [4,8-11]. Кроме того, существует естественная гетерогенность в HBV из-за разнообразия генотипов и подтипов. Существует восемь различных генотипов HBV, A-H, основанных на последовательности ДНК. Внутри них представлены девять серологических подтипов, характеризующихся ограниченным числом аминокислотных заместителей в «а» детерминанте гена S, т. Е. Ayw1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr, adw2, adw4, adrq + и adrq- [12-19 ]. Генетики HBV имеют отчетливое географическое распределение [17,18]. Генотипы A и D имеют глобальное распространение, генотипы B и C преобладают в Восточной и Юго-Восточной Азии, генотип E находится в Западной Африке, генотип F встречается у коренного населения Центральной и Южной Америки, генотип G был обнаружен во Франции и США [ 20], а генотип H ограничен Центральной и Южной Америкой [15,21]. С другой стороны, стандарты, используемые для калибровки тестовых наборов HBsAg, основаны на типе подтипа генотипа А [22,23]. Более того, снижение чувствительности с вариантами HBV, вероятно, будет определяться только количественно, то есть иммуноанализ способен обнаруживать их при высоких концентрациях HBV, но не при низких концентрациях антигена. Таким образом, лабораториям, тестирующим образцы крови для HBV, все чаще требуется распознавать различные генотипы и подтипы HBV и обнаруживать очень низкие уровни поверхностного антигена гепатита B. Поэтому было рекомендовано, чтобы регулирующие органы разработали панели для оценки набора, которые включают HBsAg-реактивные образцы с подтипами и генотипами из их локальных регионов [22]. Для удовлетворения этих потребностей Международный консорциум по безопасности крови (ICBS) создал HBsAg Master Panels, которые включают в себя элементы панели, содержащие основные генотипы HBV A-F и HBsAg подтипы adw2-4, ayw1-4 и adr. Эти образцы были собраны из банков крови по всему миру для оценки чувствительности HBsAg. Это поможет национальным органам в развивающемся мире принять обоснованные решения относительно выбора анализов, которые будут использоваться, и, следовательно, помочь в создании устойчивого предложения доступных по цене, качественных, скринирующих реагентов.

Плазменные единицы были собраны ICBS из банков крови по всему миру для создания тестовых панелей, которые будут использоваться для оценки эффективности 70 тестов HBsAg. Создание мастер-панелей вируса гепатита B ICBS было завершено в марте 2005 года. Подробная характеристика панелей показана в таблицах на веб-сайте ICBS [24]. Секвенирование, генотипирование и подтипирование панели проводилось в Отделе лабораторных исследований гепатита, Отделе вирусного гепатита, Центрах по контролю и профилактике заболеваний (CDC), Атланта, GA, как описано Purdy et al. [19]. Последовательности, генотипирование и подтипирование также были независимо выполнены в Департаменте медицинских наук, общей больнице Toshiba, Токио, Япония, по методу, описанному Takahashi et al. [25]. Дальнейшая характеристика образцов проводилась в Институте Поля-Эрлиха (PEI), Ланген, Германия. Содержание HBsAg в образцах измеряли количественным архитектором HBsAg (Abbott GmbH & Co. KG, Висбаден, Германия) в международных единицах на мл (МЕ / мл), который также был сопоставлен с уровнем сывороточного HBV- ДНК [26]. Серологический профиль положительных образцов HBsAg определяли путем тестирования на анти-HBc, анти-HBc IgM, анти-HBs, анти-HBe и HBeAg, как показано на веб-сайте ICBS [24]. Все образцы были анти-ВИЧ 1/2 (Architect HIV Ag / Ab, Abbott GmbH & Co. KG) и анти-HCV-негативный (Murex HCV v4.0, Abbott Murex Biotech Ltd., Dartford, UK и Architect HCV, Abbott GmbH & Co. KG). Крупномасштабное заполнение Группы ICBS проводилось в соответствии с условиями надлежащей производственной практики в Институте биотехнологической диагностики mbH (GBD), Берлин, Германия.

Клиническая (диагностическая) чувствительность оценивалась клинической группой ICBS HBsAg, состоящей из 146 положительных образцов HBsAg. Все образцы были также анти-HBc-положительными благодаря анализу Architect Anti-HBc (Abbott GmbH & Co. KG Wiesbaden, Германия). Панель географически разнообразна, включая основные генотипы и подтипы HBV, как показано в таблице 1 (дополнительная информация об этих образцах приведена в таблице S1 в вспомогательной информации, доступной в онлайн-версии этой статьи). Серологический профиль клинической группы ICBS HBsAg представлен на веб-странице ICBS [24].

Генотипы HBV и подтипы HBsAg в клинической группе ICBS HBsAg и количественной группе ICBS HBsAg

Количественная группа ICBS HBsAg состоит из восьми комбинаций генотипов HBV и HBsAg, как показано в таблице 1. Аминокислотное выравнивание «a» детерминанты S-гена образцов показано в таблице 2. Последовательности сравнивались с эталонной последовательностью для подтипа генотипа А adw2 от Norder et al. [13]. Ряд разведения был создан из каждого образца путем подготовки шести концентраций HBsAg в диапазоне 4, 1, 0, 25, 0, 125, 0, 063, 0, 031 МЕ / мл с использованием дефибринированной нормальной плазмы человека в качестве разбавителя (отрицательный для анти-HBs, HBsAg, анти-HCV анти-ВИЧ 1/2, HCV-РНК и РНК ВИЧ-1). Этот диапазон концентраций был выбран для покрытия пределов обнаружения высоко- и низкочувствительных анализов HBsAg, как указано в [22]. Разбавитель служил отрицательным контролем в каждой серии разбавлений. Количественную оценку концентрации HBsAg проводили количественным Architect HBsAg (Abbott GmbH & Co. KG) по сравнению со вторым международным стандартом HBsAg ВОЗ (00/588, 33 МЕ / мл). Образцы с концентрацией

Аминокислотное выравнивание «а» детерминанты гена S восьми образцов количественной группы ICBS HBsAg

Точки представляют позиции, которые совпадают с прототипом последовательности A / adw, как указано в [13]. Показаны генотип и специфичные для подтипа остатки в соответствии с рекомендациями [14,15,18]. Остатки, определяющие генотип и подтип согласно ссылке [19], выделены жирным шрифтом. Подстановка D / ayw3 в позициях 118 и 128 подчеркнута. Показанные аминокислоты описаны с одной буквой аббревиатуры в соответствии с: IUPAC-IUB Совместной комиссией по биохимической номенклатуре.

Стандарт HBsAg Paul-Ehrlich-Institut (PEI) HBsAg был включен в качестве независимого эталонного препарата HBsAg, который характеризовался биохимическим, воспроизводимым методом [23]. В стандартном подтипе PEI HBsAg имеется единица измерения 1000 единиц PEI на мл, которые можно отнести к 2-му международному стандарту ВОЗ HBsAg. Один IU соответствует 0 · 43 единицам PEI [22]. Последовательные разведения стандарта PEI для HBsAg проводили в сыворотке плода теленка. Диапазон разбавления, испытанный для каждого анализа, составлял от 1 · 0 PEI-U / мл в двухкратной стадии до 0 · 0020 PEI-U / мл.

Отрицательная группа включает 200 образцов из Американского Красного Креста, округ Колумбия, США. Все плазменные единицы были протестированы и признаны отрицательными для маркеров HBV (HBsAg и анти-HBc), HCV (анти-HCV, HCV-РНК), ВИЧ (анти-ВИЧ 1/2, ВИЧ-1 РНК), HTLV (анти- HTLV I / II), сифилис и парвовирус B19 (ДНК-ПЦР).

Все тестовые комплекты HBsAg, которые были доведены до сведения ICBS, были приобретены на открытом рынке, а не непосредственно у производителей. Это было сделано для того, чтобы тестовые комплекты, выбранные для оценки, были от обычных производственных циклов, таким образом избегая любого возможного предвзятого отбора производителями для партий с более высокой чувствительностью, которые могут не отражать обычную эффективность анализа.

70 анализов HBsAg оценивали, включая 51 иммуноферментный анализ (EIA) и 19 экспресс-анализов. Информация об анализах, используемых в этом исследовании, включая название продукта, производителя, формат теста, структуру тестирования, номера каталогов и контактную информацию производителей, показана на веб-сайте ICBS [24].

Начиная с июня 2005 года 70 наборов тестов HBsAg были оценены в том порядке, в котором они были получены, Центром оценки тестовых наборов ICBS в Paul-Ehrlich-Institut (PEI) в Лангене, Германия. Анализы проводили и интерпретировали в соответствии с инструкциями по использованию, предоставляемыми каждым производителем. Один человек провел все испытания для одного анализа. Образцы, несогласные с присвоенным родословным статусом, повторялись в двух экземплярах, и повторяющаяся реактивная скорость принималась для расчета чувствительности и специфичности. С быстрым анализом несогласные результаты были прочитаны независимо вторым человеком. Когда два читателя не согласились, результат теста считался двусмысленным.

Для определения аналитической чувствительности перехват серии разбавлений с точкой отсечки анализа рассчитывался линейной интерполяцией между последней положительной и первой отрицательной точкой. Кроме того, преобразование результатов анализа в МЕ / мл осуществлялось путем линейной интерполяции. Результаты для стандарта рекламы PEI HBsAg и для количественной группы ICBS были выражены в МЕ / мл по сравнению со вторым международным стандартом ВОЗ HBsAg. Снижение чувствительности для различных генотипов и подтипов было рассчитано для каждого анализа в качестве фактора относительно результата для подтипа AD генома А ad2 в том же анализе. Диагностическая чувствительность и специфичность были рассчитаны в соответствии со стандартными процедурами [27, 28]. Таким образом, диагностическая чувствительность рассчитывалась как количество положительных результатов HBsAg анализа, деленное на общее количество подтвержденных положительных образцов HBsAg, умноженное на 100. Специфичность теста рассчитывалась как количество отрицательных HBsAg, найденных анализом и деленное на общее количество подтвержденных образцов отрицательной панели HBsAg проверено, умноженное на 100.

Тридцать две коммерчески доступные сероконверсионные панели HBV анализировали на кинетику концентрации HBsAg и на время, необходимое для определения указанных концентраций HBsAg 0 · 02, 0 · 05, 0 · 13, 0 · 5, 1 · 0 и 4 · 0 МЕ / мл. Панели были из SeraCare Life Science (West Bridgewater, MA) и Zeptometrix Inc. (Franklin, MA). Концентрации HBsAg элементов панели определяли с помощью Architect HBsAg (Abbott GmbH & Co. KG) и PRISM HBsAg (Abbott). Для описания кинетики обнаружения HBsAg экспоненциальная функция (exp (a * t-b)), где t = день, была установлена ​​на каждой из 32 сероконверсионных панелей (процедура «nls» из R) [29]. Чтобы оценить время до обнаружения предварительно заданных уровней HBsAg, использовалась обратная функция встроенной регрессии.

На рисунке 1 показан диапазон аналитической чувствительности тестов 70 HBsAg с подтипом adb2 генотипа A ICB HBsAg количественной группы и стандартным подтипом PEI HBsAg (1000 PEI-U / ml). Диапазон чувствительности между самым чувствительным набором тестов и наименее чувствительными устройствами HBsAg составлял от 0 до 021 МЕ / мл до> 2 · 33 МЕ / мл при стандарте PEI ad и 0,013 МЕ / мл до> 4 МЕ / мл с Количественная группа ICBS. Это представляет собой разницу в 300 раз между самым чувствительным анализом и наименее чувствительными устройствами. Двадцать три набора тестов HBsAg имели аналитическую чувствительность 1 МЕ / мл, и одна ОВОС не могла обнаружить ни одну из испытываемых концентраций HBsAg (> 4 МЕ / мл). Что касается 19-ти быстрых анализов HBsAg, можно было обнаружить 1 · 5 МЕ / мл, два экспресс-теста имели чувствительность 1 · 7-4 МЕ / мл, три экспресс-теста едва выявили 4 МЕ / мл и 13 быстрых анализов не обнаружили любой из стандартных разбавлений ICBS является положительным, т. е. эти тесты могут обнаруживать неразбавленные образцы с уровнями HBsAg более 4 МЕ / мл (подробные результаты показаны в таблице S2 в поддерживающей информации, доступной в онлайн-версии этой статьи). На рисунке 1 также показано, что в оцененных анализах подтип ADW2 генотипа ICBS (панель # 220) хорошо коррелирует с стандартом рекламы PEI HBsAg. Чувствительность восьми различных генотипов / подтипов HBV в разных анализах по сравнению с подтипом генотипа adw2 для 51 EIA показана на рисунке 2. Тридцать наборов тестов показали даже чувствительность для всех изученных генотипов / подтипов, 17 наборов тестов HBsAg показали уменьшенная чувствительность одновременно к генотипам / подтипам D / ayw3, E / ayw4 и F / adw4, один анализ показал снижение чувствительности к генотипу / подтипу D / ayw3, а другой анализ показал снижение чувствительности к генотипам / подтипам E / ayw4 и F / adw4 только. Быстрые анализы не дали непрерывных значений и не были включены в фиг.2, но один быстрый анализ также показал картину уменьшения сопутствующей чувствительности для генотипов / подтипов D / ayw3, E / ayw4 и F / adw4. Семнадцать быстрых анализов и четыре ОВОС были слишком чувствительны в диапазоне тестируемых серий разбавления (≤4 МЕ / мл), чтобы судить о количественных различиях. Степень снижения чувствительности к генотипам / подтипам варьировалась от 4 до 50 для D / ayw3 и от 2 до 20 для обоих: E / ayw4 и F / adw4. В случае снижения чувствительности, отдельно для D / ayw3 или для E / ayw4 и F / adw4, снижение чувствительности варьировалось от 2 до 3.

Различия в чувствительности EIA HBsAg для различных генотипов HBsAg A-F и подтипов adw2 / 4, adr и ayw1-4 в количественной группе ICBS HBsAg. Факторы уменьшения чувствительности выражены для каждого анализа относительно аналитической чувствительности к образцу подтипа AD-образного типа № 220 220 в том же анализе. Символы на рисунке представляют собой коэффициент уменьшения чувствительности различных наборов HBsAg EIA (n = 51). Значения цифры приведены в таблице S2 в электронной версии статьи. Быстрые тесты не были включены, поскольку они не дают непрерывных значений.

Анализируются аналитические чувствительности 70 наборов тестов на HBsAg. aAnalytical Sensitivities для каждого анализа выражаются как IU / ml по сравнению со вторым международным стандартом HBsAg WHO. b Испытательные комплекты 70 HBsAg были отсортированы в соответствии с их аналитической чувствительностью с использованием стандарта рекламы PEI HBsAg. Символ CEach на рисунке представляет собой предел обнаружения наборов HBsAg, как показано в таблице S2 в электронной версии статьи. d Пределы детекции> 2 · 3 МЕ / мл показаны как 2 · 5 МЕ / мл.

Концентрация HBsAg возрастает экспоненциально со временем последующих образцов во время сероконверсии. И наоборот, время (дни), необходимое для обнаружения HBsAg во время сероконверсии, логарифмически увеличивается с пределом обнаружения HBsAg. Это показано на рисунке 3, усредненном по 32 проверенным панелям сероконверсии (подробные результаты доступны в таблице S3 в поддерживающей информации, доступной в онлайн-версии этой статьи). Дневную задержку в обнаружении HBsAg при аналитической чувствительности анализируемых анализов сравнивали с первым положительным обнаружением HBsAg при 0 · 02 МЕ / мл. Таким образом, пределы обнаружения HBsAg 0,05 МЕ / мл, 0,13 МЕ / мл, 0 · 5 МЕ / мл, 1 МЕ / мл, 2 МЕ / мл и 4 МЕ / мл соответствуют средней дневной задержке в обнаружение анализов HBsAg 3 · 5 (диапазон 1 · 6-7 · 2), 7 · 1 (диапазон 3 · 4-14 · 6), 12 · 2 (диапазон 5 · 9-25 · 1), 14 · 8 (диапазон 7 · 1-30 · 6), 17 · 5 (диапазон 8 · 4-36 МЕ / мл) и 20 · 1 (9 · 7-41 · 4) дней соответственно. Относительно обнаружения HBsAg при 0 · 05 МЕ / мл, что соответствует архитектуре HBsAg (Abbott), это означает среднюю дневную задержку 3 · 6 (диапазон 1 · 8-7 · 4), 8 · 7 (диапазон 4 · 3-17 · 9), 11 · 3 (диапазон 5 · 5-23 · 4), 14 (диапазон 4 · 9-32 · 5) и 16 · 6 (диапазон 8 · 1-34 · 2) дней соответственно.

Корреляция аналитической чувствительности анализов HBsAg со временем, необходимым для обнаружения HBsAg. aDay delay относительно наиболее чувствительного анализа HBsAg (0 · 02 МЕ / мл). bIU / mL по сравнению со вторым Международным стандартом HBsAg ВОЗ (00/588). Geomean, среднее геометрическое значение 32 тестируемых сероконверсионных панелей; min / max, наименьшее и наибольшее число в наборе значений. Для значений цифры см. Таблицу S3 в электронной версии статьи.

Диагностическая чувствительность с клинической панелью ICBS HBsAg в 70 оцененных наборах тестов показана в таблице 3 (дополнительная информация доступна в таблице S4 в вспомогательной информации, доступной в онлайн-версии этой статьи). Восемнадцать испытательных наборов EIA были на 100% положительными, остальные 33 EIA были ложно отрицательными в 1-4 образцах (диапазон чувствительности 99 · 3-97 · 3%), а 19 быстрых анализов имели 2-8 ложных негативов (диапазон чувствительности 99 · 3-94 · 5%). Фальшивые негативы были в основном с образцами ICBS Clinical Panel № 1125, # 1135, # 1010, # 1039 и # 1015. Это было замечено с некоторыми наборами тестов HBsAg, даже если предел обнаружения фактически должен был бы определять концентрацию HBsAg в этих образцах: Шестнадцать наборов тестов были отрицательными, по крайней мере, с одним из образцов # 1125, # 1135 и # 1010, двумя EIA и два экспресс-теста не смогли обнаружить HBsAg в образце № 1039 E / ayw4 (72 МЕ / мл), а четыре экспресс-теста не выявили образец № 1015. Другие тестовые наборы HBsAg были положительными с теми же пятью образцами, но показали значительно уменьшенную чувствительность. В таблице 3 показаны коэффициенты уменьшения. Была снижена чувствительность 20-кратной чувствительности с мутантной T131I (# 1010), сниженной чувствительностью 13-120 раз с мутантом Q101H (# 1039), а мутант S143L (# 1015) обнаружил заметное снижение чувствительности от 500 до 1000 раз в двух ОВОС, которые были бы отрицательными, если бы не высокая концентрация HBsAg в образце (> 8000 МЕ / мл). Более того, некоторые быстрые анализы выявили недостатки в выявлении большего количества образцов. Один быстрый анализ был ложно отрицательным с образцами № 1105 B / ayw1 (19 · 16 МЕ / мл), № 1121, B / adw2 (35 · 14 МЕ / мл), № 1115 B / adw2 (50 · 77 МЕ / мл) , и # 1106 B / ayw1 (50 · 97 МЕ / мл). В другом экспресс-анализе не было обнаружено образца № 1032 E / ayw4 (21 · 91 МЕ / мл). Четыре других экспресс-теста были двусмысленными с образцом № 1105 B / ayw1 (19 · 16 МЕ / мл).

Относительное снижение чувствительности в анализах HBsAg с проблемными образцами клинической панели ICBS HBsAg

Подробные данные приведены в таблице S4 в электронной версии этой статьи.

Предел обнаружения см. В таблице S2.

Приблизительный относительный коэффициент снижения чувствительности по сравнению с ICBS A / adw2 (панель № 220).

Количество анализов, реагирующих с уменьшением чувствительности от общих анализов в линии.

BDL, ниже предела обнаружения.

Согласование аминокислот S-гена восьми образцов генотипа / подтипа количественной группы ICBS HBsAg показано в таблице 2. Первичная структура для различных генотипов находится в пределах ожидаемого диапазона эталонных последовательностей [13,16], но образец генотипа / подтипа D / ayw3 # 318 показывает конкретную характеристику двойного замещения A118V / T128V для конкретного штамма D / ayw3 [14]. Генотипы / подтипы D / ayw3, E / ayw4 и F / adw4, которые были обнаружены с пониженной чувствительностью в некоторых анализах, делят замещение в позиции 127, то есть P127T для подтипа ayw3 и T127I / L, специфичных для E / ayw4 и F / adw4. Более того, E / ayw4 и F / adw4 имеют специфический для генотипа остаток P140T.

Аминокислотное выравнивание гена S из пяти образцов клинической панели ICBS, которое вызывало снижение чувствительности в некоторых наборах тестов, выявило следующие мутации в детерминанте «a», как показано в таблице 4: M133L в образце № 1125, P105R в образце # 1135, T131I в образце № 1010, T / S143L в образце № 1015 и Q101H в образце № 1039.

Аминокислотное выравнивание образцов мутантов HBsAg клинической панели ICBS HBsAg, что вызвало снижение чувствительности в некоторых наборах тестов HBsAg

Точки представляют собой позиции, которые являются такими же, как последовательность в ссылке [13], но показаны вариации, специфичные для соответствующих генотипов в соответствии со ссылкой [13]. Мутации выделены жирным шрифтом и подчеркнуты. Показанные аминокислоты описаны с одной буквой аббревиатуры в соответствии с: IUPAC-IUB Совместной комиссией по биохимической номенклатуре.

Специфичность в отрицательной группе ICBS из 200 отрицательных образцов составляла 100% в 50 анализах, семь анализов показали один неспецифический результат со специфичностью 99,5%, а девять анализов показали более одного неспецифического: 99,0% (n = 4), 98,5% (n = 1), 97,0% (n = 2) и 96,4% (n = 2). Четыре анализа, хотя и были заказаны, не были представлены в достаточном количестве для определения специфичности.

Результаты оценки эффективности 70 наборов тестов HBsAg показывают, что диагностическая эффективность тестов значительно различалась. Диапазон чувствительности между наиболее чувствительными устройствами HBsAg и наименее чувствительными анализами HBsAg был более чем в 300 раз. Ферментные иммуноанализы (EIA), как правило, лучше, чем быстрые анализы. Однако также в рамках ОВОС наблюдалось значительное увеличение чувствительности в 200 раз; кроме того, пять ОВОС были менее чувствительными, чем быстрые анализы. Сочетание результатов аналитической чувствительности, клинической чувствительности и чувствительности к вариантам HBV привело к следующей общей картине эффективности. Группа из 17 анализов показала высокую аналитическую чувствительность 1 МЕ / мл). Тринадцать экспресс-анализов и одна ОВОС третьей группы не выявили ни одного из серий разведения в 4 МЕ / мл; и 5 из этих 13 экспресс-анализов выявили трудности с обнаружением концентрации HBsAg около 20 МЕ / мл в ICBS Clinical Panel.

Корреляция кинетики сероконверсии HBsAg с аналитической чувствительностью к анализу показывает, что определяемый положительный HBsAg-период в пределах обнаружения 1 МЕ / мл и 4 МЕ / мл снижается до уровней, которые не считаются подходящими для скрининга донорства крови. Задержка обнаружения HBsAg при аналитической чувствительности 1 МЕ / мл и 4 МЕ / мл составляет в среднем до 11 · 3 дней и 16 · 6 дней соответственно относительно предела обнаружения HBsAg-анализа, равного 0,05 МЕ / мл, что отражает текущий стандарт скрининга крови, например в ЕС. Предполагая подобную задержку в обнаружении HBsAg в пиковой виремии HBV, это соответствовало бы суммарному снижению обнаруживаемого положительного HBsAg периода 22 · 6-33 · 2 дня, соответственно, после инфекции HBV. Основываясь на общем обнаруживаемом HBsAg положительном периоде EIA в течение 31 дня у бессимптомных пациентов (ALT 100 МЕ / мл) HBV-инфекции [30], это означает, что практически нет обнаруживаемого HBsAg в бессимптомном HBV и значительное сокращение регистрируемого периода HBsAg в течение 82 дней при симптоматической инфекции HBV [30]. Это также показало бы невероятность, что HBsAg низкого уровня надежно обнаруживается положительно на поздней стадии разрешения и хронических носителях. Что касается быстрых тестов в целом, кажется, что дальнейшее развитие необходимо для достижения приемлемой чувствительности при скрининге крови [31].

Влияние генотипа HBV и вариабельности подтипа HBsAg на чувствительность HBsAg наблюдалось одновременно, для D / ayw3, E / ayw4 и F / adw4, в общей сложности 18 наборов тестов. Общий мотив в этих трех генотипах / подтипах, по-видимому, представлен конкретным генотипом 127, где Proline (P) изменяется Threonine (T) в D / ayw3 и Leucin (L) в E / ayw4 и F / adw4. Кроме того, образец D / ayw3 № 318 включает двойную мутацию 118/128, характерную для естественного штамма, распределенного во всем мире [14, 31, 32]. По-видимому, изменение P127T и двойная мутация T118V / A128V в D / ayw3, а также остаток P127I / L в генотипах E и F связаны с пониженной реактивностью HBsAg [32,33]. Кроме того, более сложные подстановки в положениях 118, 127 и 128 в D / ayw3 могут объяснить более выраженное снижение чувствительности по сравнению с одной заменой в положении 127 с E / ayw4 и F / adw4. Поскольку замена P127T является общей для D / ayw3 и также встречается в подтипе adot3 генотипа А, возможно, что эти подтипы также могут проявлять сниженную антигенность. В случае E / ayw4 и F / adw4 существует также определенный генотип T140S-остаток, который был постулирован, чтобы вызвать конформационное изменение детерминанта ‘a’ [19]. Фактически, в одном анализе HBsAg наблюдалась слегка пониженная чувствительность (фактор 2-3) с E / ayw4 и F / adw4, но не с D / ayw3. Другие специфичные для подтипа вариации, в том числе аллели d / y и r / w в положениях 122 и 160, и специфичные для подтипа остатки в положениях T126I, N131T, N134T, F143Y, A159G, Y161F, V168A и P178Q, по-видимому, не являются участвующих в сниженной антигенности в этом исследовании. Влияние вариативности генотипа и подтипа на чувствительность анализов HBsAg в литературе несколько неокончательно. Некоторые исследователи сообщают, что генотипы HBV A-G могут быть распознаны сравнительно с помощью коммерческих анализов HBsAg, включая генотип E [34-37]. Напротив, другие обнаружили различия чувствительности между генотипами HBV: до 10-кратных различий в чувствительности трех коммерческих анализов [38]; более низкое связывание анти-HB в 2-3 раза по сравнению с ayw и adr по сравнению с рекомендацией WHO [39]; один из 10 наборов HBsAg не дал положительных результатов с генотипом E при 0 · 2 МЕ / мл [35]; и снижение реактивности в исследованиях связывания моноклональных антител для E / ayw4 и D / ayw3 [33]. Результаты 17 высокочувствительных анализов HBsAg в этом исследовании существенно подтверждают, что наборы HBsAg, используемые в ЕС и Японии, обнаруживают генотипы HBV A-F со сравнимой чувствительностью [34,35]. Более того, настоящее исследование показывает, что значительное количество (20 наборов для тестирования со всего мира) нарушало чувствительность к генотипам D / ayw3, E / ayw4 и F / adw4.

В дополнение к генотипам / подтипам было обнаружено снижение чувствительности мутантами гена S в клинической группе ICBS. В общей сложности 32 HBsAg-анализа показали значительное снижение чувствительности с помощью одного-пяти мутантов HBsAg. Три идентифицированных мутанта HBsAg, то есть M133L (образец № 1125), T131I (образец № 1010) и S143L (образец № 1015), повлияли на чувствительность анализов HBsAg в этом исследовании, как показано в предыдущих исследованиях [4,5,9, 40]. Две другие мутации HBsAg обнаружены, P105R (образец № 1135) и Q101H (образец № 1039), находятся за пределами детерминанта а, и до сих пор не сообщалось о влиянии на чувствительность коммерческих анализов HBsAg. Мутанты S143L и Q101H не могли быть обнаружены некоторыми наборами тестов HBsAg. В других наборах тестов HBsAg снижена чувствительность разной степени (коэффициент> 2 к 100). Тем не менее, меньшее снижение чувствительности в двукратном диапазоне дало ложные отрицательные результаты, близкие к обрыву анализов, т. Е. При низких концентрациях HBsAg от 0 · 21 до 36 МЕ / мл в образцах мутантов № 1125 (M133L), № 1135 ( P105R) и # 1010 (T131I). Это еще раз свидетельствует о необходимости количественного анализа чувствительности HBsAg, а также значимости низких порогов обнаружения.

Было высказано предположение, что основной причиной различных способностей распознавания мутантов HBsAg является формат анализа, то есть использование моноклональных антител для фазы захвата и обнаружения (моно / моно) по сравнению с анализами на основе поликлонального антитела в сопряженной фазе (моно / poly) [38]. Тем не менее, в этом исследовании были анализы с сопоставимой чувствительностью к тестируемым генотипам HBV, но с недостатками в обнаружении мутантов HBsAg, а также анализы без снижения чувствительности к мутантам HBsAg, но уязвимые к генотипам / подтипам HBV. Например, анализы Advia Centaur HBsAg и Ortho HBsAg, которые имеют моно-моно-тест-тест, были слабыми при обнаружении мутанта T143L, но были обнаружены все генотипы / подтипы HBV. С другой стороны, анализ Immulite HBsAg имел трудности с обнаружением мутантов M133L и P105R, несмотря на наличие фазы поликлонального детектирования [4]. Поэтому распознавание эпитопов, по-видимому, более важно для обнаружения мутанта, чем формат анализа [9]. Наихудший сценарий, по-видимому, представлен теми наборами, которые были скомпрометированы при обнаружении мутанта и генотипа / подтипа, что указывает на моно-моно-тестовую конструкцию с недостатками в обнаружении эпитопов в циклах 1 и в цикле 2 детерминанта «а». Как правило, тестовые наборы HBsAg, которые включают множественные моноклональные антитела в фазе захвата вместе с поликлональной конъюгатной фазой, кажутся наилучшим выбором для обеспечения распознавания различных эпитопов HBsAg.

Специфичность, оцененная на панели из 200 отрицательных образцов, была на приемлемом уровне ≥99 · 5% [8] для большинства наборов для тестирования HBsAg (n = 57) и показала эффективный баланс между чувствительностью и специфичностью анализов. Тем не менее, девять анализов HBsAg показали несколько более низкие особенности в диапазоне 96 · 37-99 · 0%. Четыре анализа не были предоставлены в достаточном количестве, чтобы обеспечить тестирование специфичности. Следует отметить, что число 200 отрицательных образцов может быть слишком низким для статистически твердых выводов. Чтобы предотвратить потерю донорства крови из-за плохой специфичности анализа и избежать серьезных эксплуатационных трудностей из-за высоких скоростей исходных реактивных неспецификов, рекомендуется тестировать высокую специфичность анализа с большим количеством отрицательных образцов, например. > 2000 или 5000 [8], из целевой популяции.

В заключение ICBS разработала хорошо очерченные панели для оценки эффективности анализов HBsAg, включая чувствительность к генотипу / подтипу. Оценка 70 наборов тестов HBsAg в этом исследовании показала значительные различия в диагностической эффективности. Относительно большое количество анализов, включая все быстрые тесты, было плохой чувствительностью, что делает их непригодными для обнаружения HBsAg при низких концентрациях. Поэтому эти анализы не могут быть рекомендованы для использования в контексте общественного здравоохранения, например, при скрининге крови. Генетическая изменчивость гена S дополнительно нарушает диагностическую эффективность. Поэтому мы надеемся, что результаты исследования привлекут внимание к изменчивости наборов для тестирования HBsAg, доступных на рынке, а также помогут службам переливания крови в странах с ограниченными ресурсами, по возможности, провести локальную оценку анализов, которые будут внедрены для скрининг крови для соответствующей чувствительности и специфичности или для поиска соответствующей опубликованной информации. Для расширения доступа к высококачественному анализу также рекомендуется использовать более чем одну рутинную партию для оценки.

Эта работа относится к деятельности Международного консорциума по безопасности крови (ICBS), финансируемого Глобальной программой здравоохранения Фонда Билла и Мелинды Гейтс. Мы благодарим Отдел вирусного гепатита, Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC), Атланту, Джорджию и Ховарда А. Филдса, PhD, за научный вклад и контроль во время характеристики и последовательности образцов ICBS для создания клиническая панель. Кроме того, мы благодарны Гарольду С. Марголису (MD), бывшему директору отдела вирусного гепатита, CDC, Атланта, Джорджия за его неоценимую поддержку. Мы выражаем благодарность Департаменту медицинских наук, Главной больнице Toshiba, Токио, Япония за последовательность образцов ICBS под наблюдением доктора Шундзи Миширо. Авторы благодарны Павлу В. Холланду, М.Д. и Дж. А. Барбаре, PhD, FRCPath, за критический обзор рукописи. Особая благодарность также д-ру Питеру Волкерсу за помощь в статистическом анализе, а также за Карлу Рёдер-Грайхен, Карин Вельцель, Пегги Крамер, Ивонн Букендаль и Богусию Броль за отличную техническую помощь.

Дополнительную вспомогательную информацию можно найти в онлайн-версии этой статьи:

Таблица S1 Клиническая панель ICBS HBsAg

Таблица S2 Аналитическая чувствительность испытательных наборов 70 HBsAg

Таблица S3 Дневная задержка при обнаружении HBsAg во время сероконверсии при различных уровнях обнаружения анализов

Таблица S4 Чувствительность анализов HBsAg в клинической группе ICBS HBsAg и результаты для образцов, которые показали трудности с обнаружением некоторыми наборами тестов HBsAg

Обратите внимание: Wiley-Blackwell не несет ответственности за содержание или функциональность любых вспомогательных материалов, предоставленных авторами. Любые запросы (кроме недостающих материалов) должны быть направлены соответствующему автору для статьи.



Источник: rupubmed.com


Добавить комментарий